月季皮刺特异表达启动子proRcLAC15及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927310A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210894076.8A01H5/00(2018.01)(22)申请日2022.07.27A01H6/74(2018.01)A01H6/20(2018.01)(71)申请人北京林业大学C12R1/01(2006.01)地址100083北京市海淀区清华东路35号(72)发明人韩瑜刘笑雨卢鑫玥于超罗乐潘会堂程堂仁张启翔(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师黄爽(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/56(2006.01)C12N15/74(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12N15/84(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表1页附图3页(54)发明名称月季皮刺特异表达启动子proRcLAC15及其应用(57)摘要本发明公开了月季皮刺特异表达启动子proRcLAC15及其应用。本发明首次从月季中克隆一个皮刺特异性表达的启动子proRcLAC15，将其用于构建重组表达载体，可在植物中异源表达该启动子，达到响应损伤应答和培育优新品种等目的。将本发明应用于转基因植物研究中，在植物中能够特异性表达，同时在植物的损伤修复方面起重要的作用。CN115927310ACN115927310A权利要求书1/1页1.月季皮刺特异表达启动子proRcLAC15，其特征在于，所述启动子为：i)SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；或ii)SEQIDNO:1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且以稳定期特异性方式显示出启动子活性的核苷酸序列；或iii)在严格条件下与SEQIDNO:1所示序列杂交且以稳定期特异性方式显示出启动子活性的核苷酸序列，所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜；或iv)与i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且以稳定期特异性方式显示出启动子活性的核苷酸序列。2.含有权利要求1所述启动子的表达盒。3.含有权利要求1所述启动子或权利要求2所述表达盒的载体。4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，出发载体为pBI121。5.含有权利要求1所述启动子、权利要求2所述表达盒或权利要求3或4所述载体的工程菌。6.在植物中表达目的核酸分子的方法，其特征在于，所述方法包括向植物中导入核酸构建体，所述核酸构建体含有权利要求1所述启动子以及与所述启动子可操作性连接的目的核酸分子。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述目的核酸分子选自结构基因、调节基因、结构基因的反义基因、调节基因的反义基因或能够干扰内源基因表达的小RNA。8.根据权利要求6或7所述的方法，所述植物为双子叶植物，优选蔷薇属植物。9.根据权利要求6或7所述的方法，所述植物为月季或拟南芥。10.权利要求1所述启动子的以下任一应用：1)用于构建重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌；2)用于构建转基因植物；3)用于植物育种。2CN115927310A说明书1/7页月季皮刺特异表达启动子proRcLAC15及其应用技术领域[0001]本发明属于植物基因工程技术领域，具体地说，涉及月季皮刺特异表达启动子proRcLAC15及其应用。背景技术[0002]月季位于四大切花之首，因其独特的观赏特性和重要的经济价值，在全世界广泛栽培(HIBRANDSAINT‑OYANT等,2018)。月季的皮刺为植物表皮或皮层形成的尖锐突起，通过自然进化而来，一直是重要的育种目标，在不同的品种中皮刺的形状、大小、密度和颜色都不尽相同，植物皮刺常常起到储水和防御生物及非生物胁迫等作用(ZHOU等,2021)。目前对于月季皮刺的研究较少，研究人员开始通过基因工程技术研究皮刺的功能及分子机制。[0003]在植物的生长发育期和不同逆境胁迫下，进化出严格的基因表达调控网络。其中转录水平上的调控是基因表达的起始和关键的一步，包括基因转录的激活、抑制、延长等行为(李等,2022)。启动子则为调控基因转录的重要元件，是构建表达载体的重要组成部分，可分为组成型启动子、组织特异性启动子与诱导型启动子(刘等，2022；邓等,2021)。人们在研究过程中逐步采用组织特异性启动子和诱导型启动子替代组成型启动子，从而实现基因在特定诱导条件下或特定组织中的特异性表达(贺等,2014)。启动子调控机制十分复杂，如异源表达组织特异性启动子会改变其时空性(LI等,2008)，有待进一步研究。[0004]LAC(Laccase，漆酶)属于铜蓝蛋白氧化酶家族，与植物木质素的合成、伤口的愈合及响