月季根特异表达启动子proRcbHLH120及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927311A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210894085.7A01H6/20(2018.01)(22)申请日2022.07.27(71)申请人北京林业大学地址100083北京市海淀区清华东路35号(72)发明人韩瑜刘笑雨欧力萌连其乐于超罗乐潘会堂程堂仁张启翔(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师黄爽(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/84(2006.01)A01H5/10(2018.01)A01H5/00(2018.01)权利要求书1页说明书9页序列表1页附图3页(54)发明名称月季根特异表达启动子proRcbHLH120及其应用(57)摘要本发明公开了月季根特异表达启动子proRcbHLH120及其应用。本发明首次从月季中克隆一种脱落酸(ABA)应答的月季根特异表达的启动子proRcbHLH120，将其应用于构建特定的表达载体，可使目标基因在根中特异表达，并且响应外源激素ABA处理，达到调控月季根发育和抗逆，创制基因工程月季等目的。CN115927311ACN115927311A权利要求书1/1页1.月季根特异表达启动子proRcbHLH120，其特征在于，所述启动子为：i)SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；或ii)SEQIDNO:1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且以稳定期特异性方式显示出启动子活性的核苷酸序列；或iii)在严格条件下与SEQIDNO:1所示序列杂交且以稳定期特异性方式显示出启动子活性的核苷酸序列，所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜；或iv)与i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且以稳定期特异性方式显示出启动子活性的核苷酸序列。2.含有权利要求1所述启动子的表达盒。3.含有权利要求1所述启动子或权利要求2所述表达盒的载体。4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，出发载体为pBI121。5.含有权利要求1所述启动子、权利要求2所述表达盒或权利要求3或4所述载体的工程菌。6.在植物中表达目的核酸分子的方法，其特征在于，所述方法包括向植物中导入核酸构建体，所述核酸构建体含有权利要求1所述启动子以及与所述启动子可操作性连接的目的核酸分子。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述目的核酸分子选自结构基因、调节基因、结构基因的反义基因、调节基因的反义基因或能够干扰内源基因表达的小RNA。8.根据权利要求6或7所述的方法，所述植物为双子叶植物，优选蔷薇属植物。9.根据权利要求6或7所述的方法，所述植物为月季或拟南芥。10.权利要求1所述启动子的以下任一应用：1)用于构建重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌；2)用于构建转基因植物；3)用于植物育种。2CN115927311A说明书1/9页月季根特异表达启动子proRcbHLH120及其应用技术领域[0001]本发明属于植物基因工程技术领域，具体地说，涉及月季根特异表达启动子proRcbHLH120及其应用。背景技术[0002]基因工程技术常用于改良观赏植物性状和培育优新品种，其中开发利用高效特异的启动子对改良植物性状有重要的应用价值(李等,2015)。启动子为一段位于结构基因5’端上游区的DNA序列，是RNA聚合酶识别、结合和起始转录的重要元件，可分为组成型启动子、组织特异性启动子和诱导型启动子(邓等,2021)。组成型启动子可以调控下游的基因在不同组织不同时间段比较恒定的表达，常用的是花椰菜花叶病毒启动子(CaMV35S)，但组成型启动子在基因工程应用时，会消耗植物过多能量，打破代谢平衡，引起基因沉默，不利于植物生长(ROBINSON,1996；MCELROY等,1990；ZHENG等,2007)。组织特异性启动子只在植物特异器官或组织部位启动基因表达，其在应用上则有很大灵活性和目的性，可以更精准的调控外源基因的表达，在转基因定向改良植物性状方面有着重要的意义(贺等,2014)。其中，根特异性启动子可用于研究转基因植物的形态发生、根际分泌及损伤修复的问题(王等,2013)，最重要的是提高植物根部抗性的同时而不改变植株地上部位的性状。目前，观赏植物中的组织特异性启动子研究较少。[0003]月季是蔷薇科蔷薇属多年生木本花卉，常被作为观赏植物的模式物种进行研究，其中对月季的抗性研究较为广泛(HIBRANDSAINT‑OYANT等,2018)。根在植株生长发育及防御生物与非生物胁迫过程中起到了重要的作用，它不仅可以吸收植物生长发育所需的水分和养分，合成氨基