一种用于诊断小鼠小脑衰老的生物标记物及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927596A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202211544729.6A61K49/00(2006.01)(22)申请日2022.12.02(71)申请人中国科学技术大学地址230027安徽省合肥市黄山路443号中国科学技术大学(72)发明人宋晓元王倩倩王斐(74)专利代理机构北京博识智信专利代理事务所(普通合伙)16067专利代理师方炳生(51)Int.Cl.C12Q1/6883(2018.01)A01K67/027(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N15/113(2010.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种用于诊断小鼠小脑衰老的生物标记物及其应用(57)摘要本发明公开提供一种用于诊断小鼠小脑衰老的生物标记物及其应用，且提供了一种小脑衰老小鼠模型的构建方法，本发明的LncRNA标记物在小鼠中低表达，会导致小脑衰老相关蛋白p53、p21、p16、P38MAPK、IL‑6和γH2AX(DNA损伤的一种标记物)的表达水平均升高，且LncRNA标记物敲除，造成小鼠的学习记忆功能、运动能力以及运动协调能力严重受损，表现出明显的小脑衰老的症状，因此LncRNA标记物可以为作为在对小鼠小脑进行衰老研究过程中的，从分子水平上为小鼠小脑衰老的研究提供一种新的方向与思路；并且利用LncRNA标记物的敲除，构建出小鼠小脑衰老模型，所构建的小鼠衰老模型衰老状态易于检测和表征；饲养周期短，无需繁杂的造模过程，可稳定繁殖。CN115927596ACN115927596A权利要求书1/1页1.一种用于诊断小鼠小脑衰老的lncRNA标记物，其特征在于，所述lncRNA标记物为lncRNAGm2694。2.根据权利要求1所述的一种用于诊断小鼠小脑衰老的lncRNA标记物，其特征在于，小鼠体内lncRNAGm2694低表达，会导致小脑衰老相关蛋白p53、p21、p16、P38MAPK、IL‑6和γH2AX的表达水平均升高。3.一种用于诊断小鼠小脑衰老的试剂盒，其特征在于，其包含用于特异性检测lncRNA标记物的引物，所述lncRNA标记物为lncRNAGm2694；所述引物包括如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示核苷酸序列引物，如下：正向引物SEQIDNO.1：ACCAAGCATGTCCTGAAGATG；反向引物SEQIDNO.2：CTGGGGATACTGCTGAATCAA。4.一种小脑衰老小鼠模型的构建方法，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：1)将靶向lncRNAGm2694的基因编辑系统导入小鼠受精卵细胞的细胞核内，得到重组细胞；2)将所述重组细胞植入代孕母体，得到F0代与野生型交配，得到F1代杂合子；3)将所述F1代杂合子自交，获得的F2代纯合子即为小脑衰老小鼠模型。5.根据权利要求4所述的一种小脑衰老小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述基因编辑系统包括靶向lncRNAGm2694的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA1和sgRNA2，所述sgRNA1包括SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述sgRNA2包括SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。6.根据权利要求5所述的一种小脑衰老小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述基因编辑系统还包括括Cas9；所述Cas9包括Cas9核酸酶和/或Cas9核酸酶的mRNA。7.权利要求4至6任一项所述的一种小脑衰老小鼠模型的构建方法所构建的小脑衰老小鼠模型的应用，其特征在于，其在用于筛查治疗或预防小脑衰老药物中的应用。2CN115927596A说明书1/6页一种用于诊断小鼠小脑衰老的生物标记物及其应用技术领域[0001]本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于诊断小鼠小脑衰老的生物标记物及其应用。背景技术[0002]研究发现，在脑发育过程中有数千个lncRNA参与表达，其中高达40％的lncRNA都是脑组织特异性的，并且这些lncRNA在脑特定的发育时间点及特定的脑区域，如大脑皮层、海马和小脑中特异性高表达。与其他器官相比，在脑中表达的lncRNA进化保守性更高，表明lncRNA可能在神经系统的发育及功能维持中发挥重要作用。例如，少突胶质细胞限制性lncOL1与Suz12蛋白相互作用，促进少突胶质前体分化产生成熟少突胶质细胞，调控中枢神经系统的髓鞘产生和髓鞘修复过程。同样，BACE1‑反义转录本(BACE1‑Antisense)通过调节BACE蛋白(β‑分泌酶1)的表达来调节β‑淀粉样蛋白的生成。研究发现，lncRNAGM12371在细胞核中富集，GM12371与转录活跃的染色质有关，并调节参与海马神经元生长和发育的关键基因表