HPLC法测定降香挥发油中的橙花叔醇的含量方案.pdf

HPLC法测定降香挥发油中的橙花叔醇的含量方案一、设计背景降香为降香檀树干和树根经干燥处理后得到的心材部分,其性温、味辛，降香的主要成分对人体有行气活血、止痛等疗效,目前主要用于治疗脘腹疼痛,肝郁胁痛、外伤出血等疾病的治疗。降香油是降香药材从降香檀的树干和树根经干燥后的心材，再经水蒸气蒸馏法提取得到的物质。橙花叔醇为挥发油分得到的主要物质。橙花叔醇可以提高人体血小板中的环磷酸腺苷含量,因此该物质具有抑制血栓形成的作用。利用降香挥发油分，后续开发研究新型生物制剂这一项目在目前看来具有很高的社会效益和经济价值。橙花叔醇是一种具有挥发性香气的高分子有机化合物，分子式为C15H26O，分子量为222.36，常温下该物质为无色至草黄色的清澈液体，有微弱类似于橙花或玫瑰等花果类的轻柔气息，甜美清新且持久。当前该物质主要用于配制玫瑰型、丁香型等种类的化学合成香精，采用其作为原料产品品质较好，有一定的协调性能和定香作用。橙花叔醇这一有机化合物可溶于乙醇、丙二醇、大多数非挥发性油等物质，但不溶于甘油等物质。二、设计依据我国关于降香挥发油的功能性状等报道较少对这一方面的知识储备还比较稀缺,国外曾有从同属植物黄花梨中提取橙花叔醇的相关研究。但当前各种研究报道中的检验方法基本上都是使用气相色谐法或GC-MS法（气相色谱-质谱联用仪）。在国内，到目前为止采用高效液相色谱法进行测定的仍相对较少。HPLC其与普通的液相色谱的区别在于其分析时间短、理论塔板数高、样品用量少等。但这种检测方法的操作原理与普通的液相色谱在各方面基本上都是一致的，整体看来都是根据流动相和固定相（即色谱柱）针对样品各组分的分配系数的不同，从而实现各组分的分离。HPLC法测定的特点是:①测定比较快捷，整体检测时间非常短。同时载液的流速比较快，比液体色谱法明显要快得多。通常情况下，分析一个样品的时间在15~35分钟，有些方便检测的样品的监测时间甚至不超过5分钟。普遍来说，针对各种物质的检测所需时间往常都低于一小时；②高效：整体分离效能比较高。可针对固定相和流动相进行灵活选择，从而达到最佳分离效果。③准确性非常高：紫外线检测器的精准度可达0.01ng，进样量精准度基本上在μL级。误差通常可以控制在极小的范围之内；④可以使用的范围较广：大部分有机物可以采用这种方法进行分析，尤其是针对沸点高、分子量大、极性强、热稳差的化合物的分离与分析，充分显示出这种方法的优势；⑤高压：当以液体作为流动相，经过色谱柱时，阻力通常较大，为了使流动相迅速通过色谱柱，必须以高压施加载液；⑥使用十分方便，可以检测多种样品就用一根色谱柱就可以搞定；⑦需要的样品的量很少、容易重复利用：流经色谱柱的样品不易发生破坏。本实验以降香油挥发中橙花叔醇含量作为最主要的测定指标，选用高效液相色谱仪进行测定﹐测定了用水蒸气萃取、钴超临界萃取两种不同方法所提取的橙花叔醇含量,从而为后续进一步开发使用降香挥发油提供客观且定量的评价依据。我的这一次的实验是在我实习的公司进行的，跟随公司对橙花叔醇的含量测定过程中，对检测方法所遇到的问题进行改善设计,最终建立一种适合大范围内推广应用的该物质含量测定方法,对于橙花叔醇在实际生产中的质量控制可以提供充足的实验依据。现行国家相关标准还未针对橙花叔醇进行含量上的品质控制。本实验采用高效液相色谱分析法对降香经水蒸气馏后产生的降香油中最主要的成分——橙花叔醇的含量进行测定。该测定方法整体较为方便精确、复现性好,可为今后企业在降香油实际生产中的质量控制方案的设计提供一定的参考。三、设计方案（一）仪器与试剂1.实验仪器表1实验主要仪器实验仪器厂家（型号）JASCO高效液相色谱仪大连华洋科学仪器有限公司PV-2080pump,UV—2075Dclecter色谱柱北京迪马公司图1JASCO高效液相色谱仪图2色谱柱2.实验试剂表2实验主要试剂实验试剂厂家备注橙花叔醇对照品Sigma公司顺反异构混合物,水蒸气及CO:超临界萃取两种方法提取的挥发油自制甲醇山东禹王公司水为重蒸水(自制)图3橙花叔醇图4甲醇（二）测定方法1.色谱条件色谱条件：色谱柱为C18(200mmnX4.6mm，5μm)色谱柱；流动相为甲醇~水(78%:22%)；体积流量为1.2mL/min；检测波长213nm；进样量为10μL。2.供试品溶液的制备（1）对照品溶液的制备：第1步，先用架盘天平称取；第2步，观察电子天平上是否有异物或灰尘如果有就用小毛刷刷干净；第3步，打开电子天平开关分别用10克20克30克的砝码去校准；第4步，缓缓打开电子天平右侧玻璃门把称量纸放上去记录测量纸的重量然后再在称量纸上放入待测样品，缓缓关上电子天平右侧玻璃门第；第5步，等待到电子天平上显示的读数稳定时读数并记录数据；第6步，打开电子天平右侧玻璃门取出待测样品注意要轻拿轻