本科毕业论文---马铃薯腐烂茎线虫对低剂量杀线虫剂的适应性研究.doc

湖南农业大学硕士学位论文马铃薯腐烂茎线虫对低剂量杀线虫剂的适应性研究罗杰二0一四年五月分类号密级UDC单位代码10537湖南农业大学硕士学位论文马铃薯腐烂茎线虫对低剂量杀线虫剂的适应性研究AdaptabilityresearchofDitylenchusdestructorresponsetolowdoseofnematicides研究生姓名罗杰指导教师丁中副教授学科专业农药学研究方向农药毒理及有害生物抗药性提交论文日期论文答辩日期答辩委员会主席论文评阅人学位授予日期二○一四年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日PAGE\*MERGEFORMATV摘要热激蛋白70（Heatshockproteins，Hsp70s）是热激蛋白家族中最重要的一类家族成员，广泛存在于原核生物和真核生物的细胞区室和器官中，其序列高度保守。马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchusdestructor）是引起植物病害的重要病原物之一，每年给农业生产带来巨大的损失。杀线虫剂施用后主要以低剂量的形式存在于土壤中。本研究采用RT-PCR和RACE技术克隆了马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchusdestructor）三个热激蛋白70基因，分别命名为Dd-Hsp70-A（GenBank登录号KF792307）、Dd-Hsp70-C（GenBank登录号JQ422276）和Dd-Hsp70-F（GenBank登录号JQ422277），并利用Real-timePCR检测了马铃薯腐烂茎线虫经低剂量（10、1、0.1、0.01和0.001µg/mL）杀线虫剂阿维菌素、丙溴磷和涕灭威处理24h后，三个热激蛋白70基因表达量的变化。结果表明，Dd-Hsp70-A基因的cDNA全长为2081bp，开放阅读框为1938bp，编码了645个氨基酸；Dd-Hsp70-C基因的cDNA全长为2436bp，开放阅读框为2019bp，编码了672个氨基酸；Dd-Hsp70-F基因的cDNA全长为2092bp，开放阅读框为1959bp，编码了652个氨基酸。同源性分析结果表明，三个基因与其他线虫的热激蛋白70基因具有较高的同源性，含有HSP70家族高度保守的基序。Dd-Hsp70-A的基因组由11个外显子和10个内含子组成；Dd-Hsp70-C的基因组由13个外显子和12个内含子组成；Dd-Hsp70-F的基因组由11个外显子和10个内含子组成。蛋白质预测结构表明，克隆所得的三个基因在N端均形成了ATP酶结构域，在近C端均形成了底物肽结合结构域和C端结构域。qRT-PCR分析结果表明，经热激及低剂量阿维菌素、丙溴磷和涕灭威处理后，Dd-Hsp70-A基因与对照组相比较出现较明显的上调表达，Dd-Hsp70-C基因和Dd-Hsp70-F基因的表达与对照组相比较无显著性差异（P<0.05）。由此推测Dd-Hsp70-A基因为诱导型，Dd-Hsp70-C基因和Dd-Hsp70-F基因为组成型。生物学特性研究结果表明，残留在土壤中的阿维菌素对马铃薯腐烂茎线虫的影响较小，而涕灭威药剂对马铃薯腐烂茎线虫的影响相对较大。结果为深入研究植物寄生线虫在低剂量杀线虫剂处理下的应对机制提供了基础资料。关键词：马铃薯腐烂茎线虫，热激蛋白70，杀线虫剂，基因表达AbstractHeatshockprotein70kDa(Hsp70s)isthemostimportantproteinsamongofheatshockproteins，whicharewidelyexistsdincellchamberandorgansofbothprokaryotesandeukaryoteswithahighlyconservedsequence．Potatorotstemnematode(Ditylenchusdestructor)isoneofimportantpathogensofsweetpotatoinChina,andtheenormou