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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115960957A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202111315625.3A61K45/06(2006.01)(22)申请日2021.11.08A61P7/02(2006.01)A61K49/00(2006.01)(66)本国优先权数据202111186943.42021.10.12CN(71)申请人中国科学院动物研究所地址100101北京市朝阳区北辰西路1号院5号(72)发明人刘峰丁岩岩马东媛(74)专利代理机构北京彩和律师事务所11688专利代理师闫桑田(51)Int.Cl.C12N15/85(2006.01)C12N15/65(2006.01)A01K67/027(2006.01)A61K48/00(2006.01)权利要求书1页说明书19页附图10页(54)发明名称一种构建荧光血栓斑马鱼模型的方法、应用及治疗血栓的药物(57)摘要本发明鉴定了smarca5突变体红细胞异常聚集的表型,研究了smarca5突变体中相应的红系细胞和髓系细胞的发育情况、细胞形态和数目等特征。部分解析了smarca5调控红细胞聚集表型的机制,由此构建了一种荧光血栓斑马鱼模型,建立了静脉血栓疾病模型,并提供了一种防止红细胞聚集的或抗血栓或促进血栓溶解或降低受试者血栓形成的方法、用途及药物,以期作为血栓疾病模型用于药物筛选,具有临床指导意义。CN115960957ACN115960957A权利要求书1/1页1.一种构建荧光血栓斑马鱼模型的方法,其特征在于,包括:通过基因编辑方法获得具有smarca5突变的斑马鱼杂合体;将所述smarca5突变的斑马鱼杂合体和带有荧光的转基因斑马鱼进行交配,并从后代中筛选出具有smarca5突变表型且具有荧光的荧光血栓斑马鱼。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述smarca5突变的斑马鱼杂合体是通过CRISPR/Cas9方法对斑马鱼的染色体进行编辑而获得。3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述带有荧光的转基因斑马鱼为具有不同荧光标记的转基因斑马鱼,优选利用不同荧光标记分别标记红细胞和血管内皮细胞。4.根据权利要求1~3任一项所述的方法,其特征在于,通过基因编辑方法获得具有smarca5突变的斑马鱼杂合体并确定具有smarca5突变的斑马鱼杂合体F0;将所述smarca5突变的斑马鱼杂合体和带有荧光的转基因斑马鱼进行交配并从后代中筛选出具有smarca5突变表型且具有荧光的荧光血栓斑马鱼的步骤包括:将smarca5突变体杂合体F0与带有荧光的转基因斑马鱼进行交配,得到同时带有荧光的smarca5突变体F1代;F1代突变体中挑选smarca5突变的杂合子进行雌雄交配,得到F2代突变体胚胎;基因鉴定F2代突变体中带有荧光的smarca5突变的纯合子即为荧光血栓斑马鱼模型。5.根据权利要求1~4中任一项所述的方法,其中,所述荧光血栓斑马鱼模型是荧光血栓斑马鱼胚胎。6.一种抗血栓或促进血栓溶解的方法,其包括针对由此需要的受试者进行基因治疗以修复smarca5突变。7.荧光血栓斑马鱼在筛选用于促进血栓溶解或降低受试者血栓形成或抗血栓的药物中的用途。8.一种防止红细胞聚集的方法,包括在体外或体内过表达keap1a或敲降hmox1a。9.促进keapla的过表达或降低hmox1a的激活的物质用于制备抗血栓或促进血栓溶解或降低受试者血栓形成的药物中的用途。10.一种抗血栓或促进血栓溶解或降低受试者血栓形成的方法,包括:通过基因操作的方法使得在由此需要的受试者中过表达keap1a或使受试者的hmox1a被敲降。11.根据权利要求10的方法,其中,所述基因操作包括利用基因编辑或基因表达。12.一种用于抗血栓或促进血栓溶解或降低受试者血栓形成的药物,其包括:抑制smarca5发生突变的物质或促进keapla的过表达的物质或降低hmox1a的激活的物质。2CN115960957A说明书1/19页一种构建荧光血栓斑马鱼模型的方法、应用及治疗血栓的药物技术领域[0001]本申请涉及生物与新医药技术领域,具体涉及一种构建荧光血栓斑马鱼模型的方法及治疗血栓的药物背景技术[0002]成熟的红细胞富含血红蛋白,具有携带氧气的功能。因其具有细胞形变能力,红细胞可以在所有血管中流动,对维持机体的稳态至关重要(Rodriguez‑Garciaetal.,2016)。此外,红细胞参与血栓和止血的维持(Weisel&Litvinov,2019)。红细胞发生缺陷会导致多种疾病的发生,包括血红蛋白异常性贫血、红细胞溶解性贫血以及血栓(Katoetal.,2018;Roumenina,Rayes,Lacroix‑Desmazes,&Dimitrov,2016;