补阳还五汤抗脑缺血作用及促血管新生的机制研究.doc

补阳还五汤抗脑缺血作用及促血管新生的机制研究研究背景：随着我国入口老龄化进程的加剧,脑梗死的发病率和死亡率均呈现出逐年上升的趋势,迫切要求我们积极预防和治疗脑梗死的发生发展。药物治疗是脑梗死临床治疗的重要途径之一,对无法进行早期溶栓的患者尤为重要。在我国,补阳还五汤(BYHWD)已被用于脑梗死的预防与治疗,但其药效物质基础与作用机制有待进一步研究。随着对脑梗死后血管新生现象的研究不断深入,通过各种方式如药物等促进血管形成以增加半暗带区的血供,即治疗性血管新生,在促进脑缺血后局部血液循环、保护神经元和改善神经功能等方面起着重要作用,为脑梗死的治疗提供了一个崭新的途径,因此,深入研究BYHWD促血管新生作用并探讨其作用机制对于脑梗死的治疗具有重要意义。研究目的：本文拟观察补阳还五汤对脑梗死后血管新生的影响及其促血管新生的机制研究。(1)观察BYHWD对局灶性脑缺血大鼠神经功能及血管新生的影响。(2)研究BYHWD促过氧化氢(H202)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成的影响。(3)阐明BYHWD促H202诱导HUVECs血管生成作用机制。研究方法：首先,通过体内大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,检测大鼠神经功能缺失、脑梗死体积、脑萎缩体积、空间记忆功能、脑血流量(CBF)以及微血管密度(MVD)的变化,观察BYHWD对大鼠神经功能及血管新生的影响；其次,通过体外建立H202诱导HUVEC氧化损伤模型,检测细胞活力、细胞凋亡及成血管结构,观察BYHWD促H202诱导HUVECs血管生成的影响；最后,通过检测HUVECs细胞内活性氧(ROS)变化以及NADPH氧化酶(Nox4)蛋白的表达,阐明BYHWD促H202诱导HUVECs血管生成具体作用机制。研究结果：第一部分BYHWD能够明显改善MCAO大鼠神经功能,包括神经功能缺损以及空间学习记忆能力；显著减少MCAO大鼠脑梗死和脑萎缩体积,明显增加缺血区CBF以及缺血半暗区的MVD。第二部分BYHWD能够浓度依赖地增加H2O2诱导的HUVECs细胞活力,抑制HUVECs细胞凋亡,诱导HUVECs成血管结构。第三部分BYHWD能够浓度依赖地减少H202诱导的HUVECs细胞内ROS的产生,明显降低H202诱导的HUVECsNADPH氧化酶活性,以及Nox4蛋白的表达。结论：我们通过体内实验研究表明,BYHWD可能通过促进脑缺血后血管新生,增加局部脑血流量,从而促进神经功能恢复；通过体外实验进一步表明BYHWD作用机制可能通过下调Nox4蛋白的表达介导细胞内ROS下降,从而抑制H202诱导的HUVECs细胞凋亡,促进H202诱导的HUVECs成血管结构。