出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑—垂体—甲状腺轴的影响.doc

出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑—垂体—甲状腺轴的影响目的:通过检测出生前DEHP暴露对成年后大鼠甲状腺形态学与甲状腺功能的影响及下丘脑、腺垂体与HPT轴调控相关基因表达水平的影响,探讨出生前DEHP暴露对成年后子代大鼠甲状腺的干扰作用及可能的机制。方法:(1)将32只孕鼠按体重随机分为四个剂量组:0mg/kg(玉米油溶剂对照组)、2mg/kg、10mg/kg和50mg/kgDEHP处理组,每个剂量组8只。按1mL/100g体重的灌胃体积,自大鼠孕14天至孕19天(G14至G19)进行灌胃染毒。子代大鼠出生后第一天记为PND0。新生大鼠PND21断乳后按性别分笼饲养。(2)将子代大鼠饲养至成年时(PND70),从每窝随机选取雌、雄大鼠各1只(每个剂量组雌、雄各8只),用4%多聚甲醛将雄性大鼠和处于动情间期的雌性大鼠进行心脏灌流固定,取大鼠甲状腺组织,石蜡包埋后用Leica全自动轮转式切片机上制备厚度为6μm的甲状腺组织切片。HE染色后在显微镜下观察甲状腺组织形态学改变。(3)用相同的方法从每窝随机选取雌、雄大鼠各1只(每个剂量组雌、雄各8只),将雄性大鼠和处于动情间期的雌性大鼠断头处死后取血,采用Luminex液相芯片技术对血清中TSH、总T4和总T3的浓度进行测定。(4)取大鼠脑组织,制备成1mm厚的脑切片,根据大鼠脑立体定位图谱,确定下丘脑室旁核(paraventricularnucleus,PVN)和弓状核(Arcuatenucleus,ARC)的位置,用直径为1.25mm的打孔针在两个核区打孔取样。采用EastepSuperRNA提取试剂盒提取下丘脑PVN核区、ARC核区及垂体的总RNA,使用cDNA第一链合成试剂盒进行逆转录,实时荧光定量PCR检测Trh、Trh受体、Tsh、Npy和Npy-Y1受体的基因表达水平。结果:(1)DEHP处理组大鼠甲状腺组织形态学发生改变,与对照组相比,滤泡排列稍紊乱,滤泡上皮细胞数量增加,细胞质出现泡沫样变,滤泡腔直径缩小。(2)雌性大鼠血清TSH浓度在各处理组间无统计学差异。雄性大鼠血清TSH浓度在各处理组间存在统计学差异,与对照组比较,10mg/kg和50mg/kgDEHP处理组血清TSH浓度降低(P<0.05);雌性和雄性大鼠血清T4浓度在各处理组间无统计学差异;雌性大鼠血清中T3浓度在各处理组间存在统计学差异,与对照组相比,2mg/kgDEHP处理组血清T3浓度降低(P<0.05)。雄性大鼠血清T3浓度在各处理组间无统计学差异。(3)雌性和雄性大鼠PVN核区Trh基因表达水平在各处理组间无统计学差异;雌性大鼠垂体Trh受体基因表达水平在各处理组间无统计学差异。雄性大鼠垂体Trh受体基因表达水平在各处理组间存在统计学差异,与对照组相比,2mg/kg和10mg/kgDEHP处理组Trh受体基因表达水平升高(P<0.05)。(4)雌性和雄性大鼠垂体Tsh基因表达水平在各处理组间无统计学差异。(5)雌性大鼠ARC核区Npy基因表达水平在各处理组间无统计学差异。雄性大鼠Npy基因表达水平在各处理组间存在统计学差异,与对照组相比,50mg/kgDEHP处理组Npy基因表达水平降低(P<0.05);雌性和雄性大鼠PVN核区Npy-Y1受体基因表达水平在各处理组间无统计学差异。结论:(1)出生前DEHP暴露对成年后子代大鼠甲状腺组织结构及功能具有干扰作用。(2)出生前DEHP暴露对成年大鼠甲状腺的干扰作用机制可能与干扰HPT轴Trh受体及下丘脑ARC核区参与调控TRH合成的Npy基因表达有关。(3)出生前DEHP对甲状腺的干扰作用及作用机制可能具有性别差异。(4)出生前DEHP暴露对成年大鼠的影响具有低剂量效应。