靶向CD24和CD3的双特异性抗体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115960243A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202310026097.2(22)申请日2023.01.09(71)申请人中国药科大学地址210009江苏省南京市鼓楼区童家巷24号(72)发明人张娟杨思雨南丽迪泮明珠祁静瑶(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200专利代理师唐循文(51)Int.Cl.C07K16/46(2006.01)C12N15/13(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称靶向CD24和CD3的双特异性抗体及其应用(57)摘要本发明属于基因工程抗体技术领域，具体涉及靶向CD24和CD3的双特异性抗体及其应用。本发明公开了一种具有同时靶向人白细胞分化抗原CD24和人CD3的双特异性抗体及构型，构建方法简单，避免了异源双特异性抗体两组轻链与重链错配的可能性，降低了抗体纯化难度，得到的双特异性抗体纯度高，有较强的杀伤CD24阳性肝癌细胞作用。CN115960243ACN115960243A权利要求书1/1页1.一种双特异性抗体，其特征在于，由抗CD24的全长抗体与抗CD3抗体scFv通过linker连接形成，所述的双特异性抗体的重链由抗CD24抗体重链组成，其可变区氨基酸序列为SEQNO.1；轻链由抗CD24抗体轻链和抗CD3抗体scFv组成，CD24抗体可变区氨基酸序列为SEQNO.2，CD3抗体scFv氨基酸序列为SEQNO.3或SEQNO.4；其中的linker氨基酸序列为（GGGGS）n，n所取数值为3。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体分子，其特征在于，所述双特异性抗体具有对称结构，重链由CD24抗体重链组成，其恒定区为人IgG1型；轻链从N端到C端依次包含CD24抗体的VL、κ链CL、linker和CD3抗体scFv，其中，连接的linker氨基酸序列为（GGGGS）n，n所取数值为3。3.根据权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述重链恒定区包括具有SEQNO.5所示氨基酸序列，且重链按照EU编号234位氨基酸和235位氨基酸为丙氨酸、329位氨基酸为甘氨酸。4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，双特异性抗体为GT03或GT04，其中GT03的氨基酸序列为SEQNO.8，GT04的氨基酸序列为SEQNO.9。5.一种核酸分子，其特征在于其编码权利要求1‑4任意一项所述的双特异性抗体。6.编码如权利要求5所述的核酸分子，其核苷酸序列为SEQNO.6或SEQNO.7。7.一种表达载体，含有权利要求5或6所述的核酸分子。8.权利要求1‑3任意一项所述的双特异性抗体在制备治疗癌症药物中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的癌症为肝癌。2CN115960243A说明书1/5页靶向CD24和CD3的双特异性抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物工程领域，具体涉及一种可同时靶向人白细胞分化抗原(CD24)及CD3的双特异性抗体，能有效激活T细胞活化相关信号，可杀伤CD24阳性肝癌细胞，是一种具有桥接T细胞和肝癌细胞功能的基因工程双特异性抗体。背景技术[0002]肝癌是一种高发病率和高死亡率的恶性肿瘤，由于肝癌起病隐匿，大多数患者确诊时处于肿瘤晚期，无法通过手术切除方式治疗。肝癌的一线用药为激酶抑制剂索拉非尼，但索拉非尼在延长患者生存和提高耐受性方面仍未满足临床需求，目前还需要开发针对肝癌更有效的疗法。免疫疗法由于具有依靠自身免疫系统、能够靶向杀伤肿瘤细胞而不杀伤正常细胞的优势，受到更多人的关注，是一种有效的肿瘤治疗手段。[0003]肿瘤免疫疗法包括单克隆抗体、双特异性抗体、过继性细胞疗法和CAR‑T等，其中，由于双特异性抗体与单抗相比具有双靶向的特点，能够发挥更好的疗效，因此成为了抗体研发的热门方向。从作用机制看，双特异性抗体分为细胞桥接、双靶点阻断、免疫细胞激活和促进蛋白复合物的形成等多种类型，细胞桥接双抗是指双特异性抗体的一个臂作用于肿瘤细胞表面抗原，起到靶向作用，另一个臂作用于免疫细胞，多为效应T细胞和NK细胞，起到招募作用，细胞桥接双抗能拉进效应细胞和肿瘤细胞的距离，达到杀伤肿瘤的目的。[0004]由于肿瘤微环境中持续抗原刺激以及免疫抑制因子等的存在，肿瘤浸润T细胞表现出耗竭状态，其增殖能力和效应功能减弱或丧失。T细胞表面受体TCR识别MHC呈递的抗原刺激，识别的信号由CD3蛋白复合体传递到胞内。CD3是T细胞表面激活受体TCR的共刺激分子，胞内域包括ITAM信号基序，能将T细胞激活信号传递到胞内，从而活化T细胞。靶向CD3的单克隆抗体能结