一种重组人纤连蛋白、其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115975004A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211373780.5A23L33/17(2016.01)(22)申请日2022.11.03A61Q19/00(2006.01)C12R1/19(2006.01)(71)申请人广州远想医学生物技术有限公司地址510000广东省广州市番禺区石碁镇华腾路22号8栋(72)发明人周晗陈宁赖云颜福霞杨蒙蒙邹衡芳陈玉容(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202专利代理师严静(51)Int.Cl.C07K14/78(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)A61K8/64(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表（电子公布）附图10页(54)发明名称一种重组人纤连蛋白、其制备方法和应用(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，公开了一种重组人纤连蛋白、其制备方法和应用。本发明的重组人纤连蛋白的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。本发明重组人纤连蛋白的基因序列经过密码子优化，构建重组质粒后采用大肠杆菌表达系统表达，表达的重组人纤连蛋白表达量高达33.6％，具有完整的纤连蛋白结构与功能，能有效促进细胞粘附、增殖和迁移；可在食品、化妆品、保健品、药械等领域应用。本发明的提供的重组人纤连蛋白的制备方法基因序列稳定，表达量高，且制备的重组人纤连蛋白生物学活性高、纯度高。CN115975004ACN115975004A权利要求书1/1页1.一种重组人纤连蛋白，其特征在于，所述人纤连蛋白的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。2.一种人纤连蛋白的重组质粒，其特征在于，所述质粒包含权利要求1所述的重组人纤连蛋白的核苷酸序列。3.一种重组人纤连蛋白的高产宿主菌，其特征在于，所述高产宿主菌包含权利要求2所述的重组质粒。4.根据权利要求3所述的高产宿主菌，其特征在于，所述高产宿主菌为大肠杆菌。5.一种重组人纤连蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取权利要求3所述的高产宿主菌发酵培养，得发酵液；(2)离心所得发酵液收集菌体，用裂解液重悬菌体，得菌悬液；(3)破碎所得菌悬液，0℃～4℃条件下离心收集上清；(4)过滤收集的上清，得重组人纤连蛋白。6.根据权利要求5所述的的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述发酵的基础培养基包括：蛋白胨15g/L～30g/L，酵母粉10g/L～15g/L，葡萄糖5g/L～20g/L，磷酸二氢钾2.0g/L～2.5g/L，磷酸氢二钾15g/L～16g/L，硫酸镁1.5g/L～2.5g/L，氯化锌0.08g/L～0.12g/L，硫酸锰0.08mg/L～0.12mg/L，钼酸钠0.08mg/L～0.12mg/L，氯化钙0.08mg/L～0.12mg/L。7.根据权利要求5所述的的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述发酵的补料培养基包括补料A和补料B；所述补料A包括：蛋白胨100g/L～220g/L和酵母粉80g/L～120g/L；所述补料B包括：葡萄糖450g/L～650g/L和硫酸镁8g/L～12g/L；所述补料采用非反馈指数流加补料，起始补料速度为8mL/h～12mL/h，按指数梯度增加，每小时增加8mL～12mL。。8.根据权利要求5所述的的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述裂解液包括15mM～25mM的tris和15mM～25mM的pbs；所述菌体和裂解液的质量体积比为1:(8～10)。9.一种美容组合物，其特征在于，包含权利要求5～8任一项权利要求所述的制备方法制备的重组人纤连蛋白。10.权利要求1所述的重组人纤连蛋白、权利要求2所述的重组质粒、权利要求3或4所述的高产宿主菌、权利要求5～8任一项权利要求所述的制备方法、权利要求9所述的组合物在食品、化妆品、保健品或药械领域中的应用。2CN115975004A说明书1/9页一种重组人纤连蛋白、其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种重组人纤连蛋白、其制备方法和应用。背景技术[0002]纤连蛋白(fibronectin，FN)是一种在血液、间质外基质和细胞周基质中发现的关键黏附蛋白，是一种大分子糖蛋白，其分子量大约是440KD，由几乎两个相同的单体通过C末端二硫键相连。主要包括三种类型：I型、II型、III型。其中I型和II型含有链内二硫键，III型不含二硫键，使其在外力作用下可以部分展开。纤连蛋白的主要功能是增强细胞间粘连及细胞与基质的粘连，在调节细胞粘附、迁移、增殖等过程中发挥重要作用。[0003]目前，纤连蛋白大多数是动物的血液或组织中提取的天然的纤连蛋白，其产量有限、成本昂贵，限制了纤连蛋白的生产和其在医疗