乙醇酸氧化酶及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115975967A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211425837.1C07K19/00(2006.01)(22)申请日2022.11.15C12N9/08(2006.01)C12N15/53(2006.01)(71)申请人杭州鑫富科技有限公司C12N15/54(2006.01)地址311300浙江省杭州市临安区锦南街C12N15/70(2006.01)道上卦畈9号C12N1/21(2006.01)申请人浙江工业大学C12P7/62(2022.01)(72)发明人汪钊邵帅章银军应向贤C12R1/19(2006.01)白彦兵林行张连春陈梁刘学愚娄波何敏汪瑾汪军殷杭华伊滨(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227专利代理师温可睿(51)Int.Cl.C12N9/04(2006.01)权利要求书2页说明书12页序列表（电子公布）附图7页(54)发明名称乙醇酸氧化酶及其应用(57)摘要本发明涉及生物催化领域领域，特别涉及乙醇酸氧化酶及其应用。本发明公开了一种乙醇酸氧化酶CreGO及其在合成乙醛酸甲酯中的应用，乙醇酸氧化酶CreGO与谷胱甘肽巯基转移酶GST以连接肽GSG形成融合酶，该融合酶的表达减少了包涵体的形成，提高了乙醇酸氧化酶的表达量。以乙醇酸氧化酶CreGO与谷胱甘肽巯基转移酶GST融合酶作为催化剂构建反应体系，再结合氧气鼓泡以及加入过氧化氢酶去除了副产物过氧化氢，200mM乙醇酸甲酯经8h酶法氧化反应后，乙醛酸甲酯得率达83.4％。CN115975967ACN115975967A权利要求书1/2页1.乙醇酸氧化酶CreGO，其特征在于，具有：(1)、如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列；或(2)、如(1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个残基获得的氨基酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或(3)、与如(1)或(2)所示的氨基酸序列至少有70％同源性的氨基酸序列；所述多个为2个至115个。2.融合酶，其特征在于，包括如下组成部分：(I)、如权利要求1所述的乙醇酸氧化酶CreGO；(II)、一个或若干个连接肽；(III)、谷胱甘肽巯基转移酶；所述连接肽的氨基酸序列包括GSG；所述若干个包括2个至5个。3.如权利要求2所述的融合酶，其特征在于，所述谷胱甘肽巯基转移酶具有：(4)、如SEQIDNo.4所示的氨基酸序列；或(5)、如(4)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个残基获得的氨基酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或(6)、与如(4)或(5)所示的氨基酸序列至少有70％同源性的氨基酸序列；所述多个为2个至67个。4.酶组合物，其特征在于，包括过氧化氢酶和如权利要求2或3所述的融合酶。5.如权利要求4所述的酶组合物，其特征在于，所述过氧化氢酶具有：(7)、如SEQIDNo.6所示的氨基酸序列；或(8)、如(7)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个残基获得的氨基酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或(9)、与如(7)或(8)所示的氨基酸序列至少有70％同源性的氨基酸序列；所述多个为2个至152个。6.如权利要求1所述的乙醇酸氧化酶CreGO、如权利要求2或3所述的融合酶和/或如权利要求4或5所述的酶组合物在如下方面中的应用：(a)、制备乙醛酸甲酯；和/或(b)、提高乙醛酸甲酯得率；和/或(c)、清除乙醇酸甲酯。7.表达载体，其特征在于，包括可接受的基因元件以及：(IV)、编码如权利要求1所述的乙醇酸氧化酶CreGO的基因；和/或(V)、编码谷胱甘肽巯基转移酶的基因；和/或(VI)、一个或若干个编码连接肽的基因；所述连接肽的氨基酸序列包括GSG；所述若干个包括2个至5个。8.如权利要求7所述的表达载体，其特征在于，包括：所述编码如权利要求1所述的乙醇酸氧化酶CreGO的基因具有：(10)、如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；或2CN115975967A权利要求书2/2页(11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或(12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有70％同源性的核苷酸序列；和/或所述编码谷胱甘肽巯基转移酶的基因具有：(13)、如SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；或(14)、如(13)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(13)的相同或相似；或(15)、与如(13)或(14)所示的核苷酸序列至少有70％同源性的核苷酸序列；所述多个为2个至343个。9.宿主细胞，其特征在于，包括如权利要求1所述的乙醇酸氧化酶CreGO、如权利要求2或3所述的融合酶和/或如权利要求7或8所