一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽及其筛选方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115975005A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211573898.2A23L33/18(2016.01)(22)申请日2022.12.08(71)申请人福州大学地址350000福建省福州市福州大学城乌龙江北大道2号(72)发明人汪少芸江文婷杨傅佳陈旭蔡茜茜黄建联(74)专利代理机构北京易捷胜知识产权代理有限公司11613专利代理师蔡晓敏(51)Int.Cl.C07K14/78(2006.01)G16B30/00(2019.01)G16B40/00(2019.01)G16B50/00(2019.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽及其筛选方法和应用(57)摘要本发明涉及多肽技术领域，尤其涉及一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽及其筛选方法和应用。犁齿鲷鱼鳞抗冻肽，其氨基酸序列为：NAITDVVPAPK；筛选方法为：犁齿鲷鱼鳞抗冻肽初提物经质谱分析得到的肽序列；肽序列与冰晶棱面通过分子对接软件筛选得到的最优构象肽序列；三维分析下，以形成的氢键数量为指标，从最优构象肽序列筛选得到的抗冻肽序列。本发明提供的抗冻肽，弥补了犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的空白，并且其具有高抗冻活性，可作为抗冻剂等产品的应用。本发明的筛选方法其具有简化了分离纯化等繁琐的步骤，方法简单。CN115975005ACN115975005A权利要求书1/1页1.一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽，其特征在于，其氨基酸序列为：NAITDVVPAPK。2.如权利要求1所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽，其特征在于，其与冰晶形成氢键的位点包括THR4、ASP5、ALA9和LYS11。3.一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，其包括以下步骤：S1犁齿鲷鱼鳞抗冻肽初提物经质谱分析得到的肽序列；S2肽序列与冰晶棱面通过分子对接软件筛选得到的最优构象肽序列；S3三维分析下，以形成的氢键数量为指标，从最优构象肽序列筛选得到氢键数量在4以上的抗冻肽序列。4.权利要求3所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，其还包括以下步骤：在步骤S2前，肽序列通过蛋白质数据库筛选得到的具有胶原蛋白源的肽序列。5.如权利要求3所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，其还包括以下步骤：在步骤S2前，肽序列通过RPBS结构生物学数据库中PEP‑FOLD3.5多肽结构预测建模程序进行建模，选择模拟次数100，模型排序依据sOPEP；以评分最高的建模结果作为最终结构，筛选得到具有二级结构的肽序列。6.如权利要求3所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，抗冻肽初提物的制备包括以下步骤：犁齿鲷鱼鳞粉加水制成的鱼鳞浆料液，调节pH值至弱碱性，加入胰蛋白酶36～38℃下酶解4～6h，制得的降解物。7.如权利要求3或6所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，抗冻肽初提物的制备包括以下步骤：犁齿鲷鱼鳞降解物冰亲和吸附制得抗冻肽初提物。8.如权利要求3所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，其还包括以下步骤：在步骤S2前，肽序列通过抗冻多肽数据库进行初步筛选得到的肽序列。9.如权利要求3所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽的筛选方法，其特征在于，其还包括以下步骤：在步骤S2前，肽序列通过多肽毒性数据库筛选得到无毒性、亲水性＞0的肽序列。10.一种如权利要求1所述犁齿鲷鱼鳞抗冻肽作为抗冻产品的应用。2CN115975005A说明书1/6页一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽及其筛选方法和应用技术领域[0001]本发明涉及多肽技术领域，尤其涉及一种犁齿鲷鱼鳞抗冻肽及其筛选方法和应用。背景技术[0002]低温保存是食品和生物医药领域中最广泛应用的贮藏手段。但是，食品不可避免地会在冷冻保存过程中生长和低温运输过程中重结晶。[0003]抗冻蛋白是一类在结冰或亚结冰状态下能保护生物体免受伤害蛋白质，它能非依数性降低溶液冰点、有效抑制冰晶生长和重结晶的发生，抑制冻结所造成的低温损伤。抗冻肽是抗冻蛋白中具有活性的结构域部位，类似于抗冻蛋白具有对生物体的独特冷冻保护能力。抗冻肽是一类小分子蛋白或蛋白质水解物，由于天然源抗冻蛋白含量甚微，通过生物酶解技术，获取特异性多肽链结构域片段，生产成本低且性能稳定。相较于数量有限与价格昂贵的抗冻蛋白，抗冻肽更具有应用前景。[0004]鲷鱼是我国重要的经济鱼类，广泛分布于我国海域。在罐头和鱼制品的生产过程中，会产生大量的碎屑和无用的鳞片。鱼鳞下脚料通常作为废弃物处理，不仅浪费资源，而且污染环境。鲷鱼鳞富含胶原蛋白，可作为活性肽生产来源。利用鲷鱼鳞开发制备抗冻肽，不仅充分利用资源，提高鱼类加工的附加值，而且还符合绿色协调可持续发展的理念，促进鱼类加工业的发展。与传统的哺乳动物源胶原蛋白抗冻肽相比，鱼源胶原蛋白抗冻肽更具安全性。目前，利用