自身环化RNA构建体.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115997018A(43)申请公布日2023.04.21(21)申请号202280003225.5(74)专利代理机构中国贸促会专利商标事务所(22)申请日2022.03.10有限公司11038专利代理师郑天松(30)优先权数据10-2021-00312252021.03.10KR(51)Int.Cl.C12N15/113(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2022.09.22(86)PCT国际申请的申请数据PCT/KR2022/0033772022.03.10(87)PCT国际申请的公布数据WO2022/191642KO2022.09.15(71)申请人尔知渃米斯股份有限公司地址韩国京畿道(72)发明人李城旭李京炫韩升烈金智贤金圣㬚权利要求书1页说明书13页序列表12页附图32页(54)发明名称自身环化RNA构建体(57)摘要本发明的自身环化RNA构建体可在DNA载体中表达，并同时通过自我靶向和剪接(self‑targeting&splicing)反应被环化(circularization)以形成环状RNA，所述环状RNA可以仅由目的基因组成，所述目的基因包括IRES区域、起始密码子及终止密码子，由此可以快速表达肽或蛋白质。CN115997018ACN115997018A权利要求书1/1页1.一种自身环化RNA构建体，其特征在于，所述构建体具有5'‑内部引导序列(IGS)‑核酶‑目的基因‑靶位点‑3'的结构，所述IGS区域形成靶位点和鸟嘌呤：尿嘧啶摆动碱基对，形成所述摆动碱基对的鸟嘌呤位于IGS区域的5'端，形成所述摆动碱基对的尿嘧啶位于靶位点区域的3'端。2.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述靶位点区域与目的基因区域重叠。3.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述IGS区域的核苷酸序列与除所述鸟嘌呤之外的靶位点区域的核苷酸序列反向互补。4.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述核酶为I型内含子核酶。5.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述核酶包括序列号6的核苷酸序列。6.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述构建体包括在IGS区域的5'方向上延伸的核苷酸，以形成P10螺旋。7.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述构建体包括在IGS区域的5'方向及靶位点的3'方向上延伸的核苷酸，以形成P1螺旋。8.根据权利要求7所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述构建体不形成P10螺旋。9.根据权利要求1或6所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述构建体还包括IGS区域的5'方向的反义序列区域和可在靶位点的3'方向与所述反义序列区域互补结合的反义结合序列区域。10.根据权利要求9所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述反义序列区域的长度为50至400nt。11.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述目的基因区域在其5'端包括内部核糖体进入位点区域。12.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，所述构建体是核酶区域及目的基因区域通过由随机核苷酸序列组成的间隔区域连接。13.根据权利要求1所述的自身环化RNA构建体，其特征在于，在所述构建体中，目标基因区域及靶位点区域通过由随机核苷酸序列组成的间隔区域连接。14.一种载体，其特征在于，表达权利要求1的自身环化RNA构建体。15.根据权利要求14所述的载体，其特征在于，所述载体包括与编码自身环化和RNA的基因可操作地连接的启动子。2CN115997018A说明书1/13页自身环化RNA构建体【技术领域】[0001]本发明涉及一种自身环化RNA构建体等。【背景技术】[0002]环状RNA(circRNA)是一种共价连接的单链转录本(transcript)，通过RNA‑seq数据和新开发的生物信息学方法，已在各种活生物体中鉴定出数以万计的环状RNA类型。在真核生物中，已知环状RNA是通过从mRNA反向剪接(back‑splicing)产生的，并且可以通过在体内执行microRNA海绵(sponge)功能来调节基因表达。环状RNA是否诱导免疫原性尚不清楚，然而由于其结构特征，其在体内非常稳定地存在。[0003]同时，最近使用信使(messenger)RNA(mRNA)的治疗剂的开发非常活跃。然而，mRNA的局限性在于其在体内容易被降解并具有相对较短的半衰期。为了克服这一限制，将poly(A)tail连接到mRNA以提高稳定性等研究正在进行中。同样地，US10953033公开了一种基于环状RNA结构特征的用于体内基因表达目的的环状RNA。【发明内容