快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103116022A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103116022103116022A(43)申请公布日2013.05.22(21)申请号201310024101.8(22)申请日2013.01.23(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人秦毅斌李斌赵武梁家幸何颖梁保忠苏乾莲闭炳芬陈忠伟段群棚卢冰霞(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人杨立华(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书6页说明书6页序列表2页序列表2页附图1页附图1页(54)发明名称快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条及其制备方法，该试纸条由吸水纸、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、样品垫、支持物组成，硝酸纤维素膜含有由JEVE蛋白包被而成的检测线和由羊抗JEV抗体包被而成的对照线，玻璃纤维素膜结合有胶体金标记的JEVE蛋白。本发明应用膜层析间接夹心法，可以检测乙脑免疫猪或感染猪血清中特异性抗体。应用本发明试纸条检测猪乙脑抗体，操作简单、方便、快速，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，结果清晰易辨，易于推广，特别适合于基层现场检测和流行病学调查，对猪乙脑的诊断有重要的辅助作用。CN103116022ACN10362ACN103116022A权利要求书1/1页1.一种快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条，由吸水纸、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、样品垫、支持物组成，其特征在于：所述硝酸纤维素膜含有由JEVE蛋白包被而成的检测线和由羊抗JEV抗体包被而成的对照线，所述玻璃纤维素膜结合有胶体金标记的JEVE蛋白。2.根据权利要求1所述的快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条，其特征在于：用于包被检测线的JEVE蛋白浓度为1.56mg/mL，用于包被对照线的羊抗JEV抗体浓度为2mg/mL。3.根据权利要求1所述的快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条，其特征在于：所述玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水纸按照以下次序相连接并附着在支持物上面，玻璃纤维素膜与靠近硝酸纤维素膜检测线的一端相连接，吸水纸与靠近硝酸纤维素膜对照线的一端相连接；样品垫附着在玻璃纤维素膜上，样品垫的一端与硝酸纤维素膜相连接。4.根据权利要求3所述的快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上的检测线和对照线的直接间隔为3～5mm。5.根据权利要求3所述的快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条，其特征在于：所述支持物是塑料板、硬纸板或铝板。6.根据权利要求1所述快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：<1>JEVE蛋白的制备E基因重组质粒诱导表达蛋白，以亲和层析法对重组蛋白进行纯化，谷胱甘肽还原法进行复性，经透析、浓缩及紫外分光度计测定后备用；<2>羊抗JEV抗体的制备用猪JE弱毒疫苗接种免疫阴性羊2头，每隔2周加强免疫一次，共免疫3次，每次免疫的剂量分别为1头份、2头份、4头份，最后一次免疫15天后采集血液，分离血清，纯化后获得羊抗JEV多抗；<3>硝酸纤维素膜的制备将浓度为1.56mg/mL的JEVE蛋白和浓度为2mg/mL的羊抗JEV抗体依次间隔4mm喷在硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和对照线，将包被好的硝酸纤维素膜干燥后备用；<4>玻璃纤维素膜的制备JEVE蛋白最适标记pH值为9.0，JEVE蛋白与胶体金溶液的配比为15.6μg/mL；用喷膜机将胶体金标记的JEVE蛋白复合物喷涂在玻璃纤维素膜，备用；<5>将硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸按照以下次序粘贴在支持物上；将玻璃纤维膜连接在靠近硝酸纤维素膜检测线的一端，边缘附着在硝酸纤维素膜上；样品垫附着在玻璃纤维膜上，与硝酸纤维素膜相连；吸水纸连接于硝酸纤维素膜的另一端，与靠近硝酸纤维素膜对照线的一端相连接。7.根据权利要求1所述快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条的制备方法，其特征在于还包括以下步骤：<6>将粘好硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸后的材料切成60mm长、4mm宽的试纸条。2CN103116022A说明书1/6页快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条及其制备方法技术领域[0001]本发明属于猪乙型脑炎检测技术领域，尤其是一种快速检测猪乙型脑炎抗体试纸条及其制备方法。背景技术[0002]日本乙型脑炎(JapaneseencephalitisB，JE)，又称流行性乙型脑炎、乙型脑炎，简称乙脑，是由日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)引起的一种人畜共患的蚊媒传播的自然疫源性传染病。该病对人类危害巨大，是人类中枢神经系统最常