从血液样品中纯化核酸的组合物和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108026570A(43)申请公布日2018.05.11(21)申请号201680052838.2(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31(22)申请日2016.09.09100代理人杨昀徐鑫(30)优先权数据62/217,1442015.09.11US(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N15/10(2006.01)2018.03.12(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2016/0509012016.09.09(87)PCT国际申请的公布数据WO2017/044710EN2017.03.16(71)申请人康宁股份有限公司地址美国纽约州(72)发明人谢宜铮许正宜C-L·吴H·J·严权利要求书1页说明书17页附图15页(54)发明名称从血液样品中纯化核酸的组合物和方法(57)摘要本文提供从血液样品中纯化核酸的系统、试剂盒、和方法。具体而言，本文提供试剂例如包含肌氨酸的溶解缓冲液，以及使用此类试剂的方法，用于从血液样品(包括干燥的血液样品)中高产率纯化核酸。还要求从全血样品中纯化核酸的系统，其含有含胍和磷酸氢二钠的裂解缓冲液。建议磁性颗粒作为捕获核酸的固体支持物。CN108026570ACN108026570A权利要求书1/1页1.一种系统，其包括：a)包括表面活性剂的溶解缓冲液；b)包括蛋白质变性剂的裂解缓冲液；和c)核酸捕获固体支持物。2.如权利要求1所述的系统，其中所述溶解缓冲液还包括螯合剂和碱。3.如权利要求1所述的系统，其中所述裂解缓冲液还包括盐。4.如权利要求1所述的系统，其中所述核酸捕获固体支持物包括磁性或顺磁珠。5.如权利要求1所述的系统，其中所述表面活性剂包括离子型表面活性剂。6.如权利要求5所述的系统，其中所述离子型表面活性剂包括衍生自肌氨酸的离子型表面活性剂。7.如权利要求6所述的系统，其中所述表面活性剂包括N-月桂酰肌氨酸。8.如权利要求7所述的系统，其中所述表面活性剂包括[十二烷酰基(甲基)氨基乙酸钠。9.如权利要求1-8中任一项所述的系统，其中所述表面活性剂以0.05-10体积％存在于溶解缓冲液中。10.如权利要求9所述的系统，其中所述表面活性剂以3体积％存在于溶解缓冲液中。11.如权利要求1所述的系统，其中所述蛋白质变性剂包括蛋白酶K。12.一种系统，其包括：a)裂解缓冲液，所述裂解缓冲液包括硫氰酸胍、盐酸胍或它们的组合以及磷酸氢二钠；和b)核酸捕获固体支持物。13.如权利要求12所述的系统，其还包括含表面活性剂、螯合剂、和碱的溶解缓冲液。14.一种系统，其包括：a)包括N-月桂酰肌氨酸钠盐的溶解缓冲液；和b)包括硫氰酸胍的裂解缓冲液。15.如权利要求14所述的系统，其中所述溶解缓冲液还包括碱和螯合剂。16.如权利要求14所述的系统，其中所述溶解缓冲液还包括一种或多种使蛋白质变性或破坏的组分。17.如权利要求14所述的系统，其中所述裂解缓冲液还包括盐。18.如权利要求14所述的系统，其还包括核酸捕获固体支持物。19.如权利要求18所述的系统，其中所述核酸捕获固体支持物包括磁性珠或顺磁珠。20.如权利要求1-19中任一项所述的系统，其还包含一种或多种洗涤缓冲液。21.如权利要求1-20中任何一项所述的系统，其还包含磁体。22.如权利要求21所述的系统，其中所述测试样品包括血液样品。23.如权利要求22所述的系统，其中所述测试样品包括干燥血液样品。24.如权利要求22所述的系统，其中所述测试样品包括滤纸中的干燥血液。25.从样品中纯化核酸的方法，其包括：使样品与权利要求1-12中任一项的溶解缓冲液接触，以生成溶解的样品；并且使所述溶解的样品与所述裂解缓冲液接触。2CN108026570A说明书1/17页从血液样品中纯化核酸的组合物和方法[0001]本申请根据35U.S.C.§119，要求2015年9月15日提交的美国临时申请系列第62/217,144号的优先权权益，本文以该申请为基础并将其全文通过引用结合于此。技术领域[0002]本文提供从血液样品中纯化核酸的组合物、系统、试剂盒、缓冲液和方法。具体地，本文提供从包括干燥血液样品的血液样品中高产率纯化核酸的试剂、和使用这样的试剂的方法。背景技术[0003]新生儿筛查是用于识别影响出生后婴儿的存活或健康的问题的试验。在美国，每年数百万新生婴儿常规地接受检查(cdc.gov网站，新生儿筛查页)。在出生后24小时到7天内用特殊的滤纸采集新生婴儿的脚跟血(其是RobertGuthrie在1963年介绍并在1970年代开始被使用的技术)，并运输到实验室进行代谢物和酶活性分析。对于大多数新生儿筛查，从全血