用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108686634A(43)申请公布日2018.10.23(21)申请号201810509418.3B01D15/42(2006.01)(22)申请日2012.10.19B01D15/38(2006.01)B01J20/30(2006.01)(30)优先权数据61/549,1462011.10.19US(62)分案原申请数据201280062640.42012.10.19(71)申请人生物辐射实验室股份有限公司地址美国加利福尼亚州(72)发明人J·廖L·奥列奇陈虹何学梅R·弗罗斯特(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31100代理人余颖(51)Int.Cl.B01J20/286(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相(57)摘要通过一种混合式色谱系统纯化蛋白质，该系统由将具有阳离子交换和疏水官能团的配体与大孔支持物基质连接而形成，配体与支持物基质之间仅通过疏水基团和支持物基质之间链连接，所述链具有不超过3个原子的主链。CN108686634ACN108686634A权利要求书1/1页1.一种混合式色谱介质，所述混合式色谱介质包含与固体支持物偶联的配体，所述配体包含疏水基团和选自羧基基团或磺基基团的酸部分，其中所述疏水基团通过含肽连接与所述酸部分接合，所述固体支持物包含具有中值直径为0.5微米或更大的孔并且基本没有直径为0.1微米或更小的孔的颗粒，并且所述配体由所述疏水基团通过1-3个原子的链偶联至所述固体支持物。2.如权利要求1所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述颗粒具有约25微米-约150微米的中值粒径。3.如权利要求1所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述疏水基团是苯基基团。4.如权利要求3所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述酸部分是羧基基团。5.如权利要求3所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述酸部分是磺基基团。6.如权利要求1所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述配体是苯甲酰氨基乙酸。7.如权利要求1所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述配体是2-苯甲酰氨基乙磺酸。8.如权利要求6所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述连接是位于所述苯甲酰氨基乙酸的苯环上的对位的烷基氨基，从而所述配体和链一起构成2-(4-氨基苯甲酰氨基)乙酸基团。9.如权利要求7所述的混合式色谱介质，其特征在于，所述连接是位于所述2-苯甲酰氨基-乙磺酸的苯环上的对位的烷基氨基，从而所述配体和链一起构成2-(4-氨基苯甲酰氨基)-乙磺酸基团。10.一种用于制备混合式色谱介质的方法，所述方法包含：(a)将二醇-官能化的固体颗粒上的二醇基团氧化为醛基，所述固体颗粒具有中值直径为0.5微米或更大的孔并且基本没有直径为0.1微米或更小的孔并且具有约200-约300μmol/mL的二醇密度，从而将所述二醇-官能化的固体颗粒转化为醛-官能化的固体颗粒；以及(b)将胺-官能化的配体与所述醛-官能化的颗粒偶联，所述胺-官能化的配体包含与选自羧基基团或磺基基团的酸部分接合的胺-取代的疏水基团。11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述疏水基团是苯基基团。12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述苯基基团通过含肽连接与所述羧基基团接合。13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述配体是苯甲酰氨基乙酸。14.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述配体是2-苯甲酰氨基-乙磺酸。2CN108686634A说明书1/8页用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相[0001]相关申请的交叉引用[0002]本申请要求2011年10月19日提交的美国临时专利申请号61/549,146的优先权，通过引用将该申请的内容全文纳入本文。[0003]发明背景1.技术领域[0004]提供了用于纯化或分离目的的从液体源提取免疫球蛋白或其他蛋白质的技术，特别的重点在于色谱分离技术和材料。[0005]2.现有技术说明[0006]从主要是哺乳动物体液或细胞培养收获物的液体源提取免疫球蛋白和其他蛋白质通常对于得到充分浓缩或纯化形式的用于诊断和治疗用途以及实验室研究的蛋白质而言是重要的。然而，蛋白质(尤其是免疫球蛋白)的纯化通常受到以下因素的影响：低产率、使用昂贵的分离介质、分离介质浸入产物中，和在提取过程中使用的外源性材料的安全控制的影响。本发明设法解决这些问题中的至少一些。发明内容[0007]已经发现可以通过使用混合式色谱系统来实现对免疫球蛋白和其他蛋白质的异常高效提取(即纯化)，该混合式色谱系统结合阳离子交换和疏水官能团以及大孔支持基质。将阳离子交换和疏水性官能团被纳入配体中，使该配体结合至固体基质，所述固体基质具有0.5微米或更大的中值直径的孔(