固相螯合剂材料，其制备方法及其用于纯化蛋白质的用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113164915A(43)申请公布日2021.07.23(21)申请号201980078337.5(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所(22)申请日2019.11.2211247代理人李颖林柏楠(30)优先权数据62/772,2062018.11.28US(51)Int.Cl.B01J20/22(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日B01J20/288(2006.01)2021.05.27B01J20/30(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据B01D15/38(2006.01)PCT/EP2019/0822242019.11.22C07K1/22(2006.01)(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/109162EN2020.06.04(71)申请人库贝生物科技有限公司地址德国蒙海姆(72)发明人R·法比斯权利要求书5页说明书22页附图3页(54)发明名称固相螯合剂材料，其制备方法及其用于纯化蛋白质的用途(57)摘要本发明涉及一种固相螯合剂材料，可用于蛋白质纯化等方面。该固相螯合剂材料包括一个固相、结合至所述固相的多胺基团和结合至所述多胺基团的螯合基团。对于每个多胺基团，至少一部分的多胺基团与至少两个螯合基团连接。每个螯合基团包含一个或多个氨基聚羧酸基团(APA基团)，条件是每个与至少两个螯合基团连接的多胺基团的APA基团的数目为至少三个。几个APA可以形成线性螯合链或支化螯合链，其中APA基团通过双功能或三功能连接子相互连接。本发明的负载金属离子固相螯合剂材料展示强大的金属结合能力、对螯合剂、还原剂和碱性溶液的高稳定性、对蛋白质的高亲和力，以及极高的结合能力。此外，本发明涉及一种制备所述固相螯合剂材料的方法和一种以负载金属离子的固相螯合剂材料纯化组氨酸标记重组多肽和蛋白质、磷CN113164915A蛋白和金属配位蛋白质的方法。CN113164915A权利要求书1/5页1.一种固相螯合剂材料，包括一个固相、结合至所述固相的多胺基团和结合至所述多胺基的螯合基团，其中所述多胺基团的至少一部分与每个多胺基团连接到至少两个螯合基团，并且其中每个螯合基团包含一个或多个氨基聚羧酸基团(APA基团)，条件是每个与至少两个螯合基团连接的多胺基团的APA基团的数目为至少三个。2.根据权利要求1所述的固相螯合剂材料，其中所述螯合基团选自由以下组成的组：单独的APA基团、由两个或更多个经由双功能连接子部分K彼此连接的APA基团形成的线性螯合链、由三个或更多经由三功能连接子部分L彼此连接的APA基团形成的支化螯合链、以及由四个或更多经由至少一个双功能连接子部分K和至少一个三功能连接子部分L彼此连接的APA基团形成的混合螯合链。3.根据前述权利要求中任一项所述的固相螯合剂材料，其中与多胺基团结合的螯合基团的数目为至少三个，优选至少四个，和/或与其中与至少两个螯合基团连接的多胺基偶联的APA的数目在3至20的范围内，优选在4至15的范围内。4.根据前述权利要求中任一项的固相螯合剂材料，其中所述多胺基团衍生自选自二亚乙基三胺、三亚乙基四胺、四亚乙基五胺、五亚乙基六胺、直链和支化聚乙烯亚胺、聚赖氨酸、聚丙烯亚胺、大环多胺(如环烷烃、轮环藤宁和1,4,7‑三氮杂环壬烷)、支链多胺[基于季戊四醇核，如1,1,1‑三(氨基甲基)乙烷、三氨基乙基胺、三氨基丙胺、四‑乙基氨基胺、四‑乙基氨基胺、四‑氨基丙基胺和胺功能化的四功能支链PEG]组成的多胺，优选选自由二亚乙基三胺、三亚乙基四胺、四亚乙基五胺和五亚乙基六胺组成的组，更优选选自由三亚乙基四胺、四亚乙基五胺和五亚乙基六胺组成的组。5.根据前述权利要求中任一项所述的固相螯合剂材料，其中所述APA基团衍生自选自以下的APA：选自由乙二胺四胺四乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、三亚乙基四胺六乙酸、乙二胺‑N,N'‑二琥珀酸、乙二醇‑双(β‑氨基乙基醚)‑N,N,N',N'‑四乙酸、1,4,7,10‑四氮杂环十二烷‑1,4,7,10‑四乙酸和1,4,7‑三氮杂环壬烷‑1,4,7‑三乙酸组成的组。6.根据前述权利要求中任一项的固相螯合剂材料，其中至少一部分或全部螯合基团具有通式‑(APA1‑K)n‑APA2，其中APA1和APA2彼此相同或不同，n是1至50范围内的整数，并且K是双功能连接子部分。7.根据前述权利要求中任一项的固相螯合剂材料，其中所述螯合基团的至少一部分或全部具有通式和/或通式其中APA1、APA2和APA3是彼此相同或不同的氨基聚羧酸基团，并且L是三功能连接子部分。8.根据前述权利要求中任一项的固相螯合剂材料，其中所述APA和所述连接子部分和/或所述螯合基团和所述多胺基团经由酰胺部分彼此连接。2