HCV抗原的多表位融合蛋白及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110996986A(43)申请公布日2020.04.10(21)申请号201880048707.6(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公司720(22)申请日2018.07.2401代理人甘霖黄希贵(30)优先权数据17183523.42017.07.27EP(51)Int.Cl.A61K38/16(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C07K14/18(2006.01)2020.01.20C07K19/00(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据G01N33/576(2006.01)PCT/EP2018/0699852018.07.24(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/020599EN2019.01.31(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人B.乌普迈尔R.波尔哈根T.扎恩特权利要求书2页说明书15页序列表11页附图1页(54)发明名称HCV抗原的多表位融合蛋白及其用途(57)摘要本发明涉及多表位融合蛋白及其在用于检测HCV核心抗原的体外诊断免疫测定中作为校准物和/或对照的用途。多表位融合蛋白包含存在于丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的氨基酸序列中的两种至六种不同的非重叠线性肽，其中所述肽中的每一种通过由非HCV氨基酸序列组成并包含蛋白伴侣氨基酸序列的间隔区与其它所述肽分开。所述多肽中不存在其它HCV特异性氨基酸序列。另一个方面涉及用于检测HCV核心抗原的试剂盒，其包含所述多表位融合蛋白作为校准物或对照或两者。CN110996986ACN110996986A权利要求书1/2页1.一种多表位融合蛋白，其包含存在于丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的氨基酸序列中的两种至六种不同的非重叠线性肽，其中所述肽中的每一种在所述多表位融合蛋白中以一至五倍存在，并且所述不同的肽中的每一种通过由包含蛋白伴侣氨基酸序列的非HCV氨基酸序列组成的间隔区与其它所述肽分开，并且其中在所述多肽中不存在另外的HCV特异性氨基酸序列。2.根据权利要求1的多表位融合蛋白，其中所述HCV核心蛋白对应于SEQIDNO：1的氨基酸序列。3.根据权利要求1至2中任意项的多表位融合蛋白，其中所述两种至六种线性肽中的每一种的长度为5至50个氨基酸，在一个实施方案中为5至31个氨基酸，在一个实施方案中为5至25个氨基酸，在一个实施方案中为7至21个氨基酸，在一个实施方案中为15至21个氨基酸，在一个实施方案中为15至30个氨基酸，在一个实施方案中为15至65个氨基酸。4.根据权利要求1-3中任意项的多表位融合蛋白，其中存在于所述HCV核心蛋白的氨基酸序列中的三种不同的线性肽是所述多表位融合蛋白的部分。5.根据权利要求1-4中任意项的多表位融合蛋白，其中所述三种不同的线性肽包含SEQIDNO：1的氨基酸位置55-80、SEQIDNO：1的氨基酸位置90-120和SEQIDNO：1的氨基酸位置145-175内存在的线性氨基酸序列。6.根据权利要求1至5中任意项的多表位融合蛋白，其具有下式X-间隔区-Y-间隔区-Z其中X、Y和Z表示HCV核心蛋白中存在的不同的非重叠线性氨基酸序列；其中Z以一至五倍存在，且其中间隔区表示包含蛋白伴侣氨基酸序列的非HCV氨基酸序列。7.根据权利要求6的多表位融合蛋白，其中X包含存在于SEQIDNO：1的氨基酸位置55至80内的线性氨基酸序列，Y包含存在于SEQIDNO：1的氨基酸位置90至120内的线性氨基酸序列，Z包含存在于SEQIDNO：1的氨基酸位置145至175内的线性氨基酸序列。8.根据权利要求1-7中任意项的多表位融合蛋白，其中所述间隔区包含至少25个非HCV氨基酸的序列，在一个实施方案中至少100个、在一个实施方案中至少150个、在一个实施方案中至少200个、在一个实施方案中25-200个非HCV氨基酸。9.根据权利要求1-8中任意项的多表位融合蛋白，其由SEQIDNO：4至6任意组成。10.一种生产可溶性多表位融合蛋白的方法，所述方法包括步骤a)培养用表达载体转化的宿主细胞，所述表达载体包含可操作地连接的编码根据权利要求1至9中任意项的多表位融合蛋白的重组DNA分子，b)表达所述多肽和c)纯化所述多肽。11.包含根据权利要求1-9中任意项的HCV核心抗原的氨基酸序列的多表位融合蛋白在用于检测HCV核心抗原的体外诊断测试中作为校准物和/或对照材料的用途。12.一种在免疫测定中检测HCV核心抗原的方法，其中将权利要求1-9中任意项的多表位融合蛋白用作校准物和/或对照材料。13.一种用于检测HCV核心抗原的试剂盒，所述试剂盒在分开的容器中或在单个容器的分开的隔室中包含至少一种HCV核心抗原特异性结