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本发明提供一种NK细胞培养基及体外扩增NK细胞的方法,涉及细胞培养领域。该NK细胞培养基,包括基础培养基70?80%、自体血浆10?12%、活化剂0.5?2%、白细胞介素100?210μg/L、补充剂3?6%、平衡剂1?3%和0.6μg/ml?30μg/ml的单抗CD3,余量为蒸馏水。本发明的培养基设置有补充剂和平衡剂,可通过在培养过程中持续添加补充剂和平衡剂保证培养基环境的稳态,防止由于pH值和渗透压的波动影响细胞活性,提高了扩增效率,加强了本发明的新颖性。