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血液样本采集和血涂片制备血液组成:血液由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成血液的生理功能:具有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。抗凝剂的选择乙二胺四乙酸(EDTA)盐能与血液中钙离子结合成螯合物,使钙离子失去凝血作用,阻止血液凝固草酸盐常用草酸钠、草酸钾、草酸铵,溶解后的草酸根例子能与样本中的钙离子形成草酸钙沉淀,是钙离子失去凝血作用,阻止血液凝固。草酸盐对凝血因子V的保护作用差,影响凝血酶原时间测定,而且草酸盐与钙离子结合后形成的沉淀物,影响自动凝血仪检测结果,因此,草酸盐不适用于凝血检查肝素加强抗凝血酶(AT)灭活丝氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,并组织血小板凝集等作用,从而阻止血液凝固枸橼酸盐能与能与血液中钙离子结合成螯合物,使钙离子失去凝血作用,阻止血液凝固血液涂片的制备新载玻片常带有游离碱质,必须用1mol/LHCl浸泡24h,清水冲洗,干燥后备用血液细胞染色瑞士染色法瑞士染料:酸性染料伊红(E-)和碱性染料亚甲蓝(M+)组成。将适量伊红、没蓝溶解在甲醇中,即为瑞士燃料。甲醇的作用:溶解没蓝和伊红;固定细胞形态染色原理:既有物理吸附作用,又有化学的亲和作用吉母萨染色法染色原理:有天青、伊红组成瑞士染色法是最经典最常用的染色法,尤其对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果,但对细胞核的着色能力略差。吉母萨染色对细胞核、寄生虫赵瑟较好,结构更清晰,对对细胞质成分的着色能力略差。采用瑞士-吉母萨复合然也可使细胞质、颗粒、胞核均获得满意的染色效果。质量控制血涂片制备:制备涂片时,血滴愈大、角度愈大、推片速度愉快,血膜愈厚,繁殖则愈薄。血细胞比容增高、血液黏度较高时,应采用小血滴、小角度、慢推,可得满意结果;血细胞比容减低、血液较稀时,应采用大血滴、大角度、快推血液细胞染色:染色深浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、PH值密切相关红细胞检查红细胞计数检测原理:参考值:成年男性(4-5.5)*10*12/L,成年女性(3.5-5.0)*10*12/L;新生儿(6-7)*10*12/L;医学决定水平:高于6.8*10*12/L,应采取治疗措施;地狱参考值低限,为诊断贫血界限,低于1.5*10*12/L,应考虑输血临床意义:二、血红蛋白测定检测原理:HICN测定法原理:血液中除硫化血红蛋白(SHb)外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化呈高铁血红蛋白,再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物—氰化高铁血红蛋白,其在540nm处有一吸收峰,用分光光度计测定该处的吸光度,经换算即可得到每升血液中的血红蛋白度,再通过制备的标准曲线查得血红蛋白浓度SDS测定法原理:参考值:男性120-170g/L;女性110-150g/L红细胞形态检查检测原理:将细胞分布均匀的血涂片进行染色(如瑞士染色)后,根据各种细胞核成分各自的呈色特点,在显微镜下进行观察和识别参考值:瑞士染色血图片成熟红细胞形态为双凹圆盘形,细胞大小一致,平均直径为7.2um,淡粉红色,中央1/3为生理性淡然区,胞质内无异常结构。临床意义:(1)红细胞大小改变小红细胞:直径<6un的红细胞。正常人偶见,见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性球形细胞增多症大红细胞:直径>10um的红细胞。见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血恶性贫血巨红细胞:直径>15um的红细胞。见于叶酸和维生素B12缺乏所致的巨幼细胞性贫血红细胞大小不均:红细胞间直径相差一倍以上。见于严重的增生性贫血如巨幼细胞性贫血细胞内血红蛋白含量改变正常色素性:见于正常人、急性失血、再生障碍性贫血和白血病低色素性:红细胞中央生理性浅染区扩大,称为环形红细胞。见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、鉄幼粒细胞性贫血、某些血红蛋白病高色素性:红细胞中央浅染区消失,整个红细胞染成红色,胞体增大,平均红细胞血红蛋白含量增高,平均血红蛋白浓度正常。见于巨幼细胞性贫血红细胞形态改变血细胞比容测定(Hct)参考值:温氏法:男性0.4-0.5;女性0.37-0.48微量法:男性0.47±0.04,女性0.42±0.05红细胞平均指数检测原理:红细胞平均指数包括红细胞平均体积(MCV),每个红细胞平均体积大小,以飞升(fl)为单位;红细胞平均血红蛋白含量(MCH),每个红细胞内平均所含血红蛋白量,以皮克pg为单位;红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC),平均每升血红细胞中所含的血红蛋白浓度,以g/L为单位MCV=Hct/RBC80-100MCH=Hb/RBC26-34MCHC=Hb/Hct320-360红细胞体积分布宽带(RDW)检测原理:红细胞体积分布宽带(RDW)反应红细胞体积大小的异质程度,常用变异系数CV表示,由血液分析仪的红细胞体积直方图导出。作为缺铁性贫血(IDA)筛选诊断和疗效观察指标网织红细胞计数