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本发明公开了一株产L?乳酸的酿酒酵母的改造及其应用,属于定向代谢技术领域。本发明以酿酒酵母TJG12作为出发菌株,通过敲除酿酒酵母TJG12中的NADH脱氢酶NDE1和NDE2以及苹果酸脱氢酶1,并增强了苹果酸脱氢酶2的表达,同时异源表达来源于大肠杆菌的6?磷酸果糖激酶pfkA及来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶LLDH等改造,提升了酿酒酵母对L?乳酸的生产性能,可使摇瓶产量从29.5g/L提升至47.7g/L。有利于进一步提升L?乳酸的生产性能。