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本发明公开了一种牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT?PCR检测引物、探针及应用。属于生物检测技术领域。包括:引物NB?F?4716、NB?R?4949和探针NBV?TZ。本发明最佳上下游引物浓度均为500nmol/L,探针浓度为400nmol/L,在1×108~1×101copies/μL之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2=0.996,扩增效率为105.9%;特异性较强,敏感性较高,对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×101copies/μL,重复性较好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%;为BNeV的检测和分子流行病学调查提供了有力的手段。