福辛普利对糖尿病肾病大鼠保护作用的机制研究.doc

福辛普利对糖尿病肾病大鼠保护作用的机制研究目的：目前全世界尤其是我国的糖尿病患者人数快速增长,糖尿病肾病(Diabeticnephropathy,DN)作为糖尿病的重要微血管并发症之一,因其能够导致患者慢性肾损害,直至肾功能衰竭而日益受到关注。目前认为血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensinconvertingenzymeinhibitors,ACEⅠ)能够减少尿蛋白,并且延缓肾病进展,表现出明显的肾保护作用,因而作为肾保护药物在临床治疗中广泛应用,但其肾保护作用机制目前尚未被完全阐明。故本研究拟通过分析ACEI类药物—福辛普利对糖尿病大鼠血生化指标、24小时尿蛋白定量、肾皮质病理形态学以及肾皮质蛋白质谱的影响,以期发现ACEI新的作用机制。方法：本实验采用能够自发出现2型糖尿病和糖尿病肾病的大鼠(OLETF)作为研究对象,与OLETF大鼠其遗传背景相似、同周龄及性别,但非自发糖尿病的LETO大鼠作为空白对照。实验动物共分为3组：空白对照组(LETO大鼠),模型组(OLETF大鼠),福辛普利组(应用福辛普利治疗OLETF大鼠)。每4周测量各组动物的血糖、24小时尿蛋白；在36周和56周时分2次处死动物取材,检测血生化指标,并且半定量评价肾小球和肾小管间质病理变化。另一方面分离肾皮质,分别提取胞浆和胞膜的总蛋白,进一步将获得的蛋白样品经双向电泳(2-DE)分离,以胶体考马斯亮蓝染色显示后,电泳凝胶图像扫描输入计算机,用ImageMaster图像分析软件进行分析。确认组间差异蛋白点后,将凝胶中的差异蛋白点切出,经酶解和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-AssistedLaserDesorption/IonizationTime-Of-FlightMassSpectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定,获得肽质量指纹谱(Peptide-MassFingerPrinting,PMF)。然后以所得的的PMF在matrixscience数据库内进行检索所以判定差异蛋白,并以GoMiner软件进行评价。结果：模型组大鼠的血糖及24小时尿蛋白水平从6周龄起与空白对照组大鼠相比有显著升高,且随时间推移呈进行性加重,说明糖尿病肾病的模型成功建立。福辛普利组大鼠与模型组大鼠相比,其24小时尿蛋白水平,肾小球硬化指数显著降低。另一方面,蛋白质组学的研究结果显示,福辛普利组大鼠与模型组大鼠相比,在36周和56周,有17种肾皮质组织蛋白的丰度发生了显著变化。在36周时GPX3和PDHB上调；而DPYS12,PBLD,FAHD1和seleniumbindingprotein2则有下调。在56周时HSPA9,APOA1,GPX3,FBP1,ESD和MDH1上调；而DPYS12,PGKl,ECHS1,PBLD,ETFA,FAHD1,NME2和seleniumbindingprotein2则有下调。这些蛋白的功能是参与氧化应激,凋亡,糖和脂肪代谢等生物学过程。结论：福辛普利能够显著降低自发糖尿病肾病大鼠的尿蛋白排泄量和减轻其肾小球硬化,显示出良好的肾保护作用。这种治疗作用可能是通过减轻氧化应激,抑制凋亡,改善糖尿病所致糖、脂代谢障碍来实现的。