海藻酸钙敷料促进大鼠创面愈合的作用及机制研究.doc

海藻酸钙敷料促进大鼠创面愈合的作用及机制研究目的:探讨海藻酸钙敷料对体外培养的鼠成纤维细胞(L-929)的毒性和凋亡影响,初步评价该材料的细胞毒性作用并探讨对细胞增殖影响最低的条件。探讨海藻酸钙敷料对大鼠伤口愈合的影响,并观察在伤口愈合过程中对转化生长因子-β(transforminggrowthfactor,TGF-β)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)的影响。方法:①采用四唑盐(methylthiazolyltetrazolium,MTT)比色法检测不同浓度(0%、50%和100%)材料浸提液的吸光度,分别计算其各浓度成纤维细胞相对增殖率;②将成纤维细胞(L-929细胞)与海藻酸钙材料共培养72h作为实验组,采用原位标记法(Tunel法)对细胞死亡类型进行检测,观察细胞凋亡情况,并计算凋亡率,初步评价其细胞相容性;③48只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组(n=24)。制作大鼠背部皮肤伤口模型,深至皮下在创面局部以海藻酸钙敷料(实验组)或棉纱布(对照组)包扎,观察伤后3、7、14d创面愈合率的变化;于伤后3、7、14d取创面组织,石蜡包埋、切片、分别行HE和Masson染色,观察血管横断面面积与肉芽组织面积的比值。肉芽组织厚度和胶原蛋白含量(胶原面积与创面面积比的变化),并进行组织学和VEGF、TGF-β和IL-6免疫组化染色观察。结果:①MTT检测结果显示:各浓度浸提液均出现较高相对细胞增殖率,其细胞毒性均为0或1级。②TUNEL结果提示两组均出现凋亡细胞,且随培养时间呈现持续升高趋势,实验组凋亡检出率与对照组相比无明显差异。③术后3天两组肉芽组织较薄、炎症反应较重。术后7天对照组肉芽组织厚度落后于实验组;14天时实验组新生肉芽组织已基本修复完成;对照组炎症反应较前减轻。免疫组化结果示术后各期实验组伤口VEGF和TGF-β含量与对照组相比均无明显差异,术后3和7天实验组IL-6含量低于对照组,14天时两组无明显差别。④术后第3天时实验组大鼠较对照组创面愈合率明显增加(P<0.05)。术后第3天实验组与对照组组肉芽组织厚度[分别为(1540.0±118.5)μm和(1504.6±131.8)μm,P>0.05]和新生肉芽组织血管面积与肉芽组织面积之比分别为[(11.8±0.73)%和(11.3±0.67)%,P>0.05]差异均无显著性,但术后3d实验组胶原蛋白面积较对照组明显增多[分别为(45.7±5.3)%和(11.6±2.5)%,P<0.05];术后第7天实验组以上指标均高于对照组(P<0.05),第14天时这种趋势依然存在(P<0.05)。结论:海藻酸钙敷料无细胞毒性,无明显诱导细胞凋亡,具有良好细胞相容性。且炎症反应轻,提高伤口皮肤组织内的胶原蛋白含量,加速创面肉芽组织形成,促进伤口的愈合。