帕歌斯对EAE大鼠的干预作用及TNF-α、NFP表达的影响.doc

帕歌斯对EAE大鼠的干预作用及TNF-α、NFP表达的影响目的：观察药物帕歌斯（Pagosid,PGS）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE）大鼠脊髓中神经丝蛋白（Neurofilamentprotein,NFP）和肿瘤坏死因子-（Tumornecrosisfactor-,TNF-）表达的影响，研究其对多发性硬化的（multiplesclerosis,MS）是否具有保护效用及其作用机制，寻找治疗MS的更佳手段。方法：60只Wistar雌性大鼠随机分为4组：正常组（N组）、EAE模型组（EAE组）、小剂量PGS组(EAE+PGS20mg/kg.d,PGS1组)、大剂量PGS组(EAE+PGS100mg/kg.d,PGS2组)。使用豚鼠脊髓匀浆(Guineapigspinalcordhomogenate，GPSCH)制备EAE模型。N组不予任何处理；EAE组、PGS1组和PGS2组大鼠在抗原免疫后根据处死时间不同，各自在组内又分为第7天、第14天、第21天处死的三个亚组，EAE组不予给药，PGS1组和PGS2组从免疫后当天起，分别每天给予相应剂量的帕歌斯灌胃一次至处死。观察每只实验动物发病情况并给予神经系统功能评分。处死后取大鼠脊髓组织切片HE染色后在光镜下进行炎性病灶计数。免疫组化方法检测各组大鼠脊髓组织中NFP和TNF-的表达。结果：1．各组实验鼠发病率：N组无大鼠发病；EAE组发病率为88.89%；PGS1组和PGS2组动物发病率明显低于EAE组(P<0.05)；PGS2组发病率则低于PGS1组（P<0.05）。2．神经功能分值比较：免疫后第7天、第14天、第21天分别给予评分，在第14天、第21天PGS1、PGS2组评分均小于EAE组，第14天PGS2组神经功能评分小于PGS1组，差异均具统计学意义(P<0.05)。而从三个时间点进行比较，7天组、21天组与14天组有统计学差异(P<0.05)；7天与21天组比较差异不具统计学意义（P>0.05）。3．脊髓病理改变：N组大鼠脊髓中未发现炎性细胞；其余3组大鼠脊髓内均存在炎性细胞的浸润。第14天、第21天，PGS1组和PGS2组炎症细胞浸润数少于同期的EAE组(P<0.05)；PGS2组少于同期PGS1组（P<0.05）；而7天时间点PGS1组与EAE组并无明显差别（P>0.05）；各组内三个时间点比较，第7天、第21天与第14天相比较有统计学差异（P<0.05）；第7天与第21天比较，不具备统计学差异（P>0.05）。4．脊髓NFP和TNF-的表达：4组均有NFP的表达，N组脊髓NFP高表达但无TNF-阳性表达；EAE组、PGS1组、PGS2组均存在TNF-的阳性表达。阳性细胞数比较：PGS1组、PGS2组NFP高于同期EAE组，TNF-表达低于同期EAE组(P<0.05)；第14天PGS2组中TNF-阳性细胞数目低于PGS1组，NFP阳性神经元数高于PGS1组，差异有统计学意义（P<0.05）。各组中三个时间点比较：7天组、21天组与14天组相比较，差异具有统计学意义（P<0.05）；7天与21天组比较，则差异不明显（P>0.05）。结论：帕歌斯在EAE大鼠发病中具有保护作用：能降低EAE大鼠发病率，减轻疾病严重度。发挥的效应与药物剂量相关；保护机制可能与其在EAE大鼠脊髓内上调NFP和下调TNF-的表达有关。