丙泊酚、瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注肝损伤时细胞凋亡的影响及机制探讨.doc

丙泊酚、瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注肝损伤时细胞凋亡的影响及机制探讨目的评价丙泊酚、瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡的影响。方法成年健康Wistar大鼠72只,雌雄不拘,体重200-250g,按体重由大到小编1-72号,随机化分4组(n=18):①假手术组(Sham组):不夹闭肠系膜上动脉(SMA),余同肠缺血再灌注组。②肠缺血再灌注组(IIR组):夹闭SMA,于缺血前10min给予生理盐水以10ml·kg-1·h-1速率持续输注,直至实验结束。③丙泊酚组(P组):于缺血前10min给予负荷剂量丙泊酚5mg/kg,继之以20mg·kg-1·h-1速率持续输注,直至实验结束。④瑞芬太尼组(R组):于缺血前10min给予瑞芬太尼以1μg·kg-1·min-1速率持续输注,直至实验结束。各组按再灌注时间1、3、6h分3个时相,每个时相各6只。通过夹闭SMA1h制作肠缺血再灌注损伤模型,实验结束即刻留取肝左叶。光镜、透射电镜观察肝组织形态及超微结构变化。免疫组织化学法及医学图像分析系统对肝组织Bcl-2与Bax蛋白进行半定量分析。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记(TUNEL)技术检测肝细胞凋亡指数(AI)。结果①光镜及电镜观察:与Sham组比较,IIR组肝组织改变明显;P组及R组较IIR组改变减轻。②肝凋亡指数(AI)变化:与Sham组比较,IIR、P、R组各时相肝细胞凋亡指数均增高(P<0.05);与IIR组比较,P组、R组各时相肝细胞凋亡指数均减少(P<0.05);P组、R组两组各时相肝细胞凋亡指数差异均无显著性(P>0.05)。IIR、P、R组各组内AI随再灌注时间延长而增加,以再灌注6h时相最高(P<0.05)。③Bcl-2、Bax蛋白OD值及Bcl-2/Bax比值变化:与Sham组比较,IIR、P、R组各时相肝组织Bcl-2、Bax的OD值增加(P<0.05)。IIR组各时相Bcl-2/Bax比值均降低(P<0.05),P组、R组各时相Bcl-2/Bax比值均升高(P<0.05);与IIR组比较,P组、R组各时相Bcl-2的OD值、Bcl-2/Bax比值均增高,Bax的OD值均减少(P<0.05);P组、R组两组各时相Bcl-2、Bax的OD值、Bcl-2/Bax比值差异均无统计学意义(P>0.05)。各组中1、3、6h三个时相间Bcl-2、Bax的OD值及Bcl-2/Bax比值差异均无显著性(P>0.05)。结论①肠缺血再灌注可造成远隔脏器肝脏细胞凋亡的发生。②丙泊酚、瑞芬太尼可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达,减轻肝细胞凋亡,对肠缺血再灌注时大鼠肝脏有一定的保护作用。③丙泊酚与瑞芬太尼对肠缺血再灌注肝损伤的保护作用差异不具统计学意义。