定量PCR-引物、探针设计原则.doc
俊英****22
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定量PCR-引物、探针设计原则.doc
定量PCR引物、探针设计原则自90年代Taqman探针诞生以来,虽然荧光探针(引物)不断有新的技术出现,但是作为一种经典的定量PCR技术,Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选,这主要是因为相对于SYBR荧光染料,Taqman探针具有序列特异性,只结合到互补区,而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系,因此特异性强灵敏度高,而且条件优化容易;而相对于杂交探针,Taqman探针只要设计一条探针,因此探针设计较便宜方便,而且也能完成基本的定量PCR要求。当然Taqman定量方法由于还
定量PCR-引物、探针设计原则.doc
定量PCR引物、探针设计原则自90年代Taqman探针诞生以来,虽然荧光探针(引物)不断有新的技术出现,但是作为一种经典的定量PCR技术,Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选,这主要是因为相对于SYBR荧光染料,Taqman探针具有序列特异性,只结合到互补区,而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系,因此特异性强灵敏度高,而且条件优化容易;而相对于杂交探针,Taqman探针只要设计一条探针,因此探针设计较便宜方便,而且也能完成基本的定量PCR要求。当然Taqman定量方法由于还
实时荧光定量PCR——TaqMan探针法及设计原则.ppt
实时荧光定量PCR——TaqMan探针法序列选取应在基因的保守区段;避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构;典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%;引物之间的TM相差避免超过2℃;引物的3’端避免使用碱基A,引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基;为避免基因组的扩增,引物设计最好能跨两个外显子;Taqman探针技术要求片段长度在50bp-150b
PCR引物的设计原则.doc
PCR引物的设计原则:①引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。②产物不能形成二级结构。③引物长度一般在15~30碱基之间。④G+C含量在40%~60%之间。⑤碱基要随机分布。⑥引物自身不能有连续4个碱基的互补。⑦引物之间不能有连续4个碱基的互补。⑧引物5′端可以修饰。⑨引物3′端不可修饰。⑩引物3′端要避开密码子的第3位。1.引物的特异性引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。2.避开产物的二级结构区某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响,选择扩增片段时最好
荧光定量PCR用引物与探针组合及其反应体系.pdf
本发明公开了一种荧光定量PCR引物与探针组合及其反应体系。本发明具有以下优点和效果:作为分子诊断的金标准,荧光定量PCR方法的准确性和稳定性,是其一直作为其他分子生物学技术的参照依据。HPV病毒亚型众多,亚型间的同源相似性较高,区分不同亚型对于HPV的检测鉴定工作具有重大意义。本发明针对22个不同亚型的HPV病毒,分别设计并筛选出22组特异性引物和与之对应的FAM标记的Taqman探针。适用于生殖泌尿道、宫颈脱落细胞、组织及其他体液的22种亚型人乳头瘤病毒核酸检测。使用Bioline扩增体系,qPCR检测