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本发明公开了用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用。本发明提供了特异引物对,由SEQIDNO.1所示的单链DNA分子和SEQIDNO.2所示的单链DNA分子组成。本发明还提供了一种鉴定鸡性别的方法,包括如下步骤:以待测鸡的基因组DNA为模板,采用所述特异引物对进行PCR扩增,如果得到一种扩增产物、待测鸡为或候选为公鸡,如果得到两种扩增产物、待测鸡为或候选为母鸡。本发明与现有技术相比具有以下优点:公鸡和母鸡具有条带数量的区别,并且特征带的差异约为400bp,可通过琼脂糖电泳检测,操作简单方便,不容易误判,鉴别结果快速准确,便于基层推广和使用,具有广阔的市场应用前景。