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本发明涉及生物医学领域,具体公开了一种复合荧光纳米粒子的制备方法,包括如下步骤:(1)向二甘醇、油酸、三乙胺、二甲基亚砜、甲基丙酸烯酐和N,N?二甲基甲酰胺的混合溶液中加入葡萄糖、2,5?二羟基对苯二甲酸、反丁烯二酸、对苯二甲酸、2?甲基咪唑和草酸,混合均匀,得到第一混合溶液;(2)向第一混合溶液中加入L?半胱甘酸和水,搅拌,得到第二混合溶液;(3)将含有银离子的化合物与含有另一种金属离子的化合物混合,得到第三混合溶液;(4)将第二混合溶液和第三混合溶液混合,得到第四混合溶液,将第四混合溶液加热、结晶、超声处理、离心,所得固体即为复合荧光纳米粒子。