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本发明公开一种柔性SERS基底及其制备方法与应用,包括步骤:1)处理氧化铝模板;2)配制浇注溶液;3)浇注、除去模板;4)配制孵育溶液;5)孵育处理;6)贵金属纳米颗粒修饰。本发明原料易得、实施简便,使用的唯一材料是氧化铝;实验条件易于满足,使用普通的油浴锅进行加热即可满足孵育要求,无需使用其他仪器,这也避免了苛刻的实验条件带来的潜在的安全隐患;实验过程所有材料均无毒,对人体健康没有影响;适用性广,由此方法制备得到的SERS基底可用于有害物质的检测;制备简单,可以大规模地制备以获取大量的SERS基底;获得的SERS基底的灵敏度优于一般方法,且具有良好的信号再现性。