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本发明公开了一种丝素蛋白生物材料墨水及其制备方法和应用,属于组织工程再生医学领域。本发明提供的丝素蛋白生物材料墨水的制备方法,包括如下步骤:(1)对蚕茧进行脱胶处理,得到脱胶后的丝素蛋白;(2)将所述脱胶后的丝素蛋白溶于甲酸溶液中,溶解后离心,弃上清液,得到高浓度丝素蛋白溶液;(3)在所述高浓度丝素蛋白溶液中添加乙酸溶液或者冰醋酸和1,4?二氧六环的混合液,即得到所述丝素蛋白生物材料墨水。本发明的方法获得了具有剪切变稀性的丝素蛋白生物材料墨水,不需要复合其他材料就具有3D可打印性,实现了丝素蛋白单一材料的3D打印。