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本发明提供了一种丝素蛋白水凝胶敷料及其制备方法和应用,本发明属于医用敷料技术领域。本发明提供了一种丝素蛋白水凝胶敷料的制备方法,包括如下步骤:(1)将丝素蛋白纤维用溶解液溶解,得到丝素蛋白原液;(2)所述丝素蛋白原液经透析后,得到丝素蛋白溶液;(3)所述丝素蛋白溶液经旋流剪切后,浸入载体,再经热处理进行原位凝胶化,得到丝素蛋白水凝胶敷料。本发明所制备的丝素蛋白凝胶敷料,不使用任何添加助剂,通过物理交联方法、剪切协同热效应,可在载体上进行原位可控凝胶化,应用于医药领域具有更高的安全性和可操作性。