消瘤片水提工艺.docx

消瘤片水提工艺消瘤片水提工艺消瘤片水提工艺【1】【摘要】目的优选消瘤片水提工艺。方法以咖啡酸含量、总多糖含量和浸膏得率为指标，采用L9(34)正交设计试验，对加水倍量、提取时间、提取次数等因素进行考察，以确定最优提取工艺。结果较优工艺为加水14倍量，回流提取3次，每次1h。结论优选得到的消瘤片水提工艺稳定、可行。【关键词】咖啡酸;总多糖;单因素实验;正交试验消瘤片为新疆医科大学附属中医医院妇科长期临床实践的经验方,其主要功效为活血化瘀、攻坚消瘤。为方便患者使用，本课题组拟采用先进的技术和工艺，将其制成片剂-消瘤片。根据各味药材的主要有效成分和理化性质，对方中蒲公英、茯苓等7味药用水提取，其中咖啡酸为蒲公英的主要有效成分，茯苓等药材主要含有多糖类成分。因此，本研究以咖啡酸、多糖为主要评价指标，采用单因素及正交试验设计优选其水提工艺，现报道如下。1仪器与试药1.1仪器Waters2695高效液相色谱仪(美国Waters公司),Cintra20紫外可见分光光度计(GBC科技仪器有限公司),AL204电子天平、AG135电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]，SK3300LH超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，DirectQTM5超纯水仪(MilliporeCorporation,Bedford,MA,U.S.A.)。1.2试药咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110885-200102，供含量测定用)，葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503，供含量测定用)，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，试验中其它试剂均为分析纯。茯苓、蒲公英等7味药材由新疆医科大学附属中医医院提供，经检验均符合《中国药典》2010年版一部项下规定。2方法与结果2.1HPLC法测定咖啡酸含量2.1.1色谱条件色谱柱SYMMETRYC18(4.6mm×150mm,5μm)，流动相为甲醇-乙腈-0.4%磷酸(22∶2∶76)，检测波长323nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量15μl。2.1.2对照品溶液的制备精密称取咖啡酸对照品3.30mg，加甲醇适量溶解并定容至10ml量瓶中,定容至刻度，摇匀。精密吸取1ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。再精密吸取2ml置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀,作为贮备液。2.1.3供试品溶液的制备及测定称取该处方各味药材适量，加一定量水回流提取一定时间，待药液冷却至室温后滤过，精密移取4ml置10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，离心，取上清液经微孔滤膜(0.45μm)过滤后，取15μl注入高效液相色谱仪测定，供试品溶液高效液相色谱图见图1。图1供试品溶液高效液相色谱图2.1.4标准曲线的绘制分别精密吸取贮备液1、2、3、4、5ml，置于5ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得标准溶液。取上述5个标准溶液，分别用微孔滤膜(0.45μm)过滤后，各取15μl注入高效液相色谱仪测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标进行回归，得回归方程为：Y=79202X-8895.9,相关系数r=0.9992。结果显示咖啡酸在0.528～2.64μg/ml范围内呈良好的线性关系。对照品溶液高效液相色谱图见图2。图2对照品溶液高效液相色谱图2.1.5日内、日间精密度试验取同一对照品溶液15μl在同一天内重复进样5次，并连续测定5d，计算日内及日间精密度。结果日内精密度RSD=0.78%，日间精密度RSD=1.64%，表明本方法精密度良好。2.1.6稳定性试验取同一供试品溶液15μl，按0、2、4、6、12、24、48h间隔进样。测得咖啡酸的峰面积RSD=0.83%，表明供试品溶液在室温下放置48h内稳定。2.1.7重复性试验取供试品6份，按2.1.3项下方法制备供试液，分别精密吸取15μl进样，测定峰面积。结果RSD=1.73%。表明该方法重复性良好。2.1.8加样回收率试验取2.1.3项下一定量经测定已知含量的供试品溶液，加入不同量的咖啡酸对照品溶液，制备成高、中、低浓度的各3份样品，按2.1.1项下色谱条件进行含量测定。结果平均加样回收率为100.34%，RSD=1.17%(n=9)。2.1.9阴性对照试验精密称取处方中水提部分除蒲公英外的6味药材，按照2.1.3项下的方法制备缺蒲公英的阴性对照溶液。用高效液相色谱法测定，进样量15μl。结果表明，消瘤片处方中水提部分中其余药材对咖啡酸的含量测定无干扰。阴性对照溶液高效液相色谱图见图3。图3阴性对照溶液高效液相色谱图2.2紫外可见分光光度法测定总多糖含量