干细胞基础和临床应用基础研究.ppt

干细胞基础和临床应用基础研究内容安排一、理论课1、细胞体外培养基本技术和方法讨论2、干细胞的分离与培养3、胚胎干细胞4、成体（组织）干细胞5、讨论交流二、实验课1、干细胞的分离、培养与观察三、考核内容：设计一份完整的“XX干细胞培养的基本方法（流程）”时间：2014年1月干细胞基础与应用基础研究（一）细胞体外培养基本技术和策略讨论（一）基本概念1（一）基本概念2（二）基本条件（模拟）一、水二、无机盐三、理化条件1三、理化条件2三、理化条件3四、培养基的选择1二、常用类型天然培养基：血清、胚胎渗出液、水解蛋白合成培养基：RPMI1640、EagleMEM系列（BME、DMEM、IMEM、αMEM）、HamF12。无血清培养基：化学成分确定的培养基，对实验目的和细胞类型的针对性强。1、基础培养液：DMEM∶HamF12=1∶12、附加成分：根据实验目的、细胞类型等因素设定。如B27、N-2，针对神经元；G-5，针对神经胶质细胞（三）基本步骤一、取材1一、取材2一、取材3二、分离与纯化1二、分离与纯化2机械分离与酶学分离1机械分离与酶学分离2基于物理性状的分离纯化技术1介质选择的原则：1、密度范围大包括所需要的密度。2、溶液的黏度低较小离心力和较短离心时间可达到分离效果3、易于测定其密度（浓度）。4、不损伤细胞、不改变细胞生物学特性。5、离心分离后易于除去。6、不妨碍、不影响后续实验研究的目的。基于物理形状的分离纯化技术3常用介质基于物理形状的分离纯化技术4常用介质基于物理形状的分离纯化技术5常用方法基于物理形状的分离纯化技术6常用方法基于物理形状的分离纯化技术7常用方法根据其它细胞特性的分离方法1根据其它细胞特性的分离方法2三、原代培养1三、原代培养2三、原代培养3植块培养三、原代培养4细胞培养三、原代培养5培养空间四、传代培养1四、传代培养2五、“二倍体细胞”的问题六、体外培养细胞的生长与观察1六、体外培养细胞的生长与观察2六、体外培养细胞的生长与观察3六、体外培养细胞的生长与观察4六、体外培养细胞的生长与观察5六、体外培养细胞的生长与观察6六、体外培养细胞的生长与观察7六、体外培养细胞的生长与观察9关于“隔天换液”的辨析：细胞周期（cellcycle)：是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，分为间期与分裂期两个阶段六、体外培养细胞的生长与观察8细胞株（系）的基本概念1细胞株（系）的基本概念2细胞株（系）的基本概念3细胞克隆细胞周期与细胞同步化国内外细胞库资料整理