植物细胞有丝分裂的制片和观察.doc

实验一光学显微镜的使用、植物细胞有丝分裂的制片和观察一、目的与要求1、掌握光学显微镜的构造及使用方法。2、掌握植物根尖细胞有丝分裂制片技术。3、掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。二、实验原理有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。三、实验材料洋葱（Alliumcepa,2n=16）根尖组织四、实验仪器显微镜、分析天平、酒精灯、剪刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、标签纸、胶水、棕色瓶。五、实验试剂1、卡诺固定液：冰醋酸:无水酒精=1:3（体积比）2、染色液（改良苯酚品红染液）配法顺序如下：原液A：取3克碱性品红溶于100毫升70%酒精中，此液可以长期保存。原液B：取A液10毫升加入90毫升5%苯酚(即石炭酸)水溶液中(2周内使用)。原液C：取B液55毫升加入6毫升的冰醋酸和6毫升38%的甲醛(可长期保存)。染色液：取C液10-20毫升，加入90-80毫升45%醋酸和1.5克山梨醇。3、1N盐酸六、实验步骤（一）材料准备通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，20～25℃光照条件下培养2～3天，待根长1～2cm时，于上午9:00～1:00剪下根尖备用。（二）预处理为了获得较多中期分裂相的细胞，同时使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，将根尖浸在蒸馏水中于在1～4℃低温下处理24小时。（三）固定用蒸馏水洗净材料，再用卡诺固定液（用量应为材料体积的15倍以上）室温下固定30～60分钟。固定的材料如暂不制片，可经90％酒精→80％酒精→70％酒精（各半小时）浸泡进行转换，最后置于70％酒精内放入0～4℃冰箱，约可保存半年。如保存时间太长，需重新固定后再用。（四）解离根尖、茎尖等体细胞需经处理，除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，才便于压片。这种处理过程称为解离，解离时间的长短依植物材料和解离液的不同而不同。时间短细胞不易压散，时间过长，细胞被压破，且影响染色效果。取材料的根尖，在生长点处切取1毫米左右（一般一个根尖可取4～5段），放入1NHCl酸解10分钟左右，取出，用水漂洗三遍。注：1NHCl由36%~38%浓盐酸取83ml定容至1升配置而成。（五）制片选取已处理过的根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，呈十字形交叉盖在有根尖的载玻片上，用大拇指按压在载玻片的中央，使根尖压成一簿层，然后将两载玻片分开，各滴一小滴染色液进行染色，稍等片刻，取一盖玻片，盖玻片一边靠在离材料不远的载玻片上，左手握镊子顶着盖玻片，右手握解剖针托住盖玻片徐徐放下，若染色液不能布满盖玻片时，可在盖玻片边缘稍加染色液，然后用一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。制好的片子若不能及时进行显微镜观察，可用矾士林临时封住盖玻片四周。（六）观察制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（10×10）调焦观察，寻找到具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10×40）下观察。七、显微镜使用注意事项1．取显微镜时必须右手握镜臂，左手托镜座，严禁单手提镜，勿使镜体倾斜，防止目镜从镜简中滑出或碰撞显微镜。2.注意姿势。将显微镜平稳地放在自己左侧的适当地方，镜臂向着自己，镜检者姿势要端正。一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录。两眼必须同时睁开，以减少疲劳。3.将镜台向上调节时，须从侧面观察，以防压碎标本玻片或损坏物镜镜头。4．一般情况下观察标本均要加盖盖玻片，切忌水、洒精或其它药品浸损镜头或镜台。观察标本时，必须按低倍镜——高倍镜的顺序进行。5．显微镜各部要保持清洁，光学部分必须用镜头纸擦试，绝对禁止用其它物品擦试。其它部分可用纱布轻轻擦试。6．观察、绘图时应双眼同时张开，以便在观察的同时绘图。7.使用显微镜时一定严格按规程操作，遇到问题，如机件不灵，千万不可用力转动，切忌任意拆修，应立即报告指导教师。8．使用完毕要将显微镜擦试干净，恢复原状，转动物镜转换器，将4×物镜转到光路上，使镜台调至接近物镜。9．关闭光圈、电源，适当下降聚光镜，将塑料罩罩好，及时收回镜箱。八、作业1.制作细胞有丝分裂各时期图象片子1～2张。2.描绘所观察到的细胞有丝分裂过程中各时期的图象，并简要说明染色体的行为特征。