激素对小鼠胚胎体外发育的影响.docx

激素对小鼠胚胎体外发育的影响摘要探讨小鼠胚胎体外发育过程中,2种激素(孕马血清促性腺激素PMSG、人绒毛膜促性腺激素HCG)对早期胚胎发育的影响。取原核期胚胎培养于不同的培养体系中,确定适合胚胎发育的最佳体外培养体系;在胚胎培养液中加入不同浓度的激素,观察激素对体外发育的影响。试验发现含10%胎牛血清的人输卵管液培养液(HTF)是该试验条件下小鼠早期胚胎发育的最佳培养液;在该培养液中添加不同浓度和不同种类的激素后,各发育阶段胚胎的发育率与未添加激素的对照组相比均有所下降,但未发现浓度依赖性。由此可认为,高浓度的PMSG和HCG对体外培养的胚胎发育有抑制作用,可降低胚胎发育到各阶段的比例,尤其是显著降低了囊胚的发生率。关键词激素;小鼠胚胎;体外发育;影响AbstractThesystemformouseembryoculture,andtheeffectsoftwodifferenthormoneonmousepreimplantationembryosinvitrowereexplored.One-cellmouseembryoswereculturedindifferentculturemediatodeterminetheoptimasystem,andthendifferentconcentrationhormonewereaddedtothemediumtoobservetheeffectofhormoneonmouseembryodevelopmentinvitro.HTF+10%FBSmediumwasthebestculturesystemofmousepreimplantationembryodinviting.AfterhormoneofdifferentconcentrationsandkindswereaddedtoHTF+10%FBSmedium,thedevelopmentrateofdifferentstagesembryosdeclinescomparedwithcontrolgroup.Highconcentrationhormonecoulddepressdevelopmentofmousepreimplantationembryosinvitro,andlessensthedevelopmentalproportionofdifferentstageembryos,thensignificantdecreasedtheoccurrenceofblastocyst.Keywordshormone;mousepreimplantationembryos;developmentinvitro;effects早期胚胎体外培养技术在发育生物学、胚胎移植、转基因动物等领域的研究工作中都有很重要的作用[1]。早期胚胎发育是一个复杂的过程,在此过程中,可受到各种激素的影响,激素通过不同途径来调控早期胚胎发育[2,3]。目前,在不孕治疗中经常使用到各种促排卵激素,在孕妇妊娠期间也经常使用一些激素类药物,有报道,使用不同剂量和不同种类的激素,可能影响到胚胎的质量[4-7]。另外,环境中也存在着多种激素的类似物,这些激素和激素类似物对胚胎发育的影响研究,目前还缺乏系统性,尤其是较高浓度的激素水平如何影响胚胎的发育、胚胎发育与激素的浓度之间是否存在着剂量依存性、同种激素对不同发育阶段的胚胎的影响等,这些都还不十分明了,很有必要进行深入的研究。本研究旨在以小鼠为试验动物模型,在基础胚胎发育培养液中分别加入不同种类和不同浓度的激素,以探讨其对鼠早期胚胎体外发育的影响机理。1材料与方法1.1试验试剂孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)购自宁波第二激素厂,HTF培养液购于美国In-Vitro公司,透明质酸酶购自Vitrolife公司,BSA粉剂购自BovomaX公司,FBS(胎牛血清)购自Gibco公司。胚胎操作液配制:CZB-HEPES(NaCl为478.9mg/100mL,KCl为36.3mg/100mL,KH2PO4为15.9mg/100mL,MgSO4为14.195mg/100mL,NaHCO3为210.0mg/100mL,C6H12O6为100.0mg/100mL,CaCl2·2H2O为25.0mg/100mL,乳酸钠(60%糖浆)为370mg/100mL,链霉素为50mg/100mL,青霉素为60mg/100mL,HEPES为238.0mg/100mL)。使用时,添加BSA粉剂4mg/mL,过滤除菌,使用前加温,用于体外胚胎的收集和清洗操作。1.2试验动物及处理昆明品系性成熟小鼠,6～8周龄,购自浙江中医药大学动物实验中心,饲养于光照控制(10L∶14D)、恒温恒湿的饲养室,自由采食饮水