HPLC测定VC银翘片中连翘苷的含量.docx

HPLC测定VC银翘片中连翘苷的含量HPLC测定VC银翘片中连翘苷的含量【摘要】目的建立VC银翘片中连翘苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定，用C18柱（4.0mm×250mm，5μm），以乙腈-水（25:75）为流动相，检测波长277nm。结果连翘苷的线性范围为0.4～3.0μg；连翘苷平均回收率为99.28%，RSD=2.81%(n=5)。结论所用方法测定样品灵敏度高，重复性好，能有效地控制VC银翘片的质量。【关键词】VC银翘片；连翘苷；HPLC；含量测定1仪器与试仪器：Waters600E液相色谱仪；Waters600泵，Waters2997光电二极管矩阵检测器；Millennium32色谱工作站。FA1004分析天平(上海良平仪表有限公司)，KQ3200超声清洗器(中国昆山市超声仪器有限公司)。连翘苷（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110821-200406）。试剂及试样:乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸水,VC银翘片（自制）。2含量测定2.1色谱条件［1］色谱柱Symmetryshield(Rp184.6mm×250mm);乙腈-水（25:75）为流动相；检测波长277nm；流速1ml/min；柱温23℃。2.2对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀，即得。2.3样品供试液的制备精密称取VC银翘片除去糖衣研细后的粉末3.500g，置居塞锥形瓶中，精密加入甲醇45ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理25min，放冷至室温，再称定重量，补加甲醇至原重量。摇匀，滤过，弃去初滤液。精密量取续滤液15ml，蒸至近干，加中性氧化铝1.5g拌匀，加至中性氧化铝柱（100～120目，3g，内径1～1.5cm）上，用70%的`乙醇240ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至15ml容量瓶中，并用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液为供试品溶液。2.4系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液，VC银翘片供试液，缺连翘的阴性样品供试液各10μl，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定。2.5线性关系考察［2］分别精密吸取对照品溶液2、3、5、10、15μl，按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积对进样量（μg）回归，得回归方程C=1.5812×10-6-0.04196，相关系数r=0.9999，表明连翘苷在0.4～3.0μg之间线性关系良好。2.6精密度试验精密吸取VC银翘片供试液10μl，连续进样5次，记录峰面积，结果峰面积的RSD=0.85%,结果表明仪器精密度良好。2.7重复性试验取VC银翘片样品5份，按供试品制备方法制备样品，精密吸取10μl，测定含量。结果分别为0.1789mg/片、0.1784mg/片、0.1781mg/片、0.1782mg/片、0.1786mg/片，平均含量为0.1784mg/片，RSD为0.18%。结果表明,本方法重复性良好。2.8稳定性试验按重复性试验中的1号样，分别在2、4、6、8、12、24h测定，RSD为0.63%，结果表明，本品在24h内稳定性良好。2.9回收率试验取已知含量的VC银翘片（C=0.1784mg/片）加入一定量对照品，按供试品制备方法制备样品，测定总量，计算回收率，结果见表1。表1回收率试验2.10样品测定取批号为050313、050201、04122三批样品,依供试品制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量。其连翘苷含量分别为:0.1785mg/片、0.1780mg/片、0.1790mg/片。3讨论(1)本方法供试品溶液制备方法简便易行，在该色谱条件下连翘苷峰分离效果良好，回收率符合要求，结果理想。(2)本品采用中性氧化铝柱洗脱的方法除去杂质,把对设备的损害尽可能降到最低程度。(3)根据对流速的考察,发现当流速为1.0ml/min的时候，连翘苷分离效果更好,出峰时间更适中。【参考文献】1国家药典委员会.中华人民共和国药典,2005年版一部.北京：化学出版社，2005：117～118.2赵子剑，赵启鹏.复方石淋通片的质量标准研究.现代药，2005，25（5）：69-70.