HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量.docx

HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量HPLC法测定益肝灵片中水飞蓟宾的含量现在是学生党的下学期，大四生都在准备实习以及毕业论文的撰写，下面YJBYS为大家带来自考医学专业论文一篇，仅供阅读!更多资讯尽在应届毕业生网!【摘要】目的建立测定益肝灵片中水飞蓟宾含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为DikmaDiamonsidC18柱，甲醇?1%冰醋酸(体积比49∶51)为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长288nm，柱温为30℃。结果水飞蓟宾的质量浓度在20.68～82.72μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9999;平均回收率为97.5%，RSD为2.8%。结论本文方法简便、快速、准确可靠，可用于益肝灵片的质量控制。【关键词】益肝灵片;水飞蓟宾;高效液相色谱法益肝灵片为保肝药，主要成分为水飞蓟素，属于黄酮类化合物，由水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟丁3种同分异构体组成[1]。现行国家标准采用紫外分光光度法，以水飞蓟宾计算益肝灵片中水飞蓟素的含量，测定结果是水飞蓟素(总黄酮)的含量[2]，结果受颜色变化等因素影响较大，并不能准确测定水飞蓟宾的.含量。为进一步评价益肝灵片的质量，本文建立了益肝灵片中水飞蓟宾含量测定的高效液相色谱法，并与紫外分光光度法进行比较。本文方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。1仪器与试药DIONEX高效液相色谱仪(戴安公司)，UVD170U型可变波长检测器,P680A四元梯度泵,Chromeleon化学工作站;紫外分光光度计(日立U3210);SK7200H型超声波清洗器(上海科导超声仪器厂)，工作频率59kHz，输出功率350W。水飞蓟宾对照品(中国药品生物制品检定所，0856-200203)，益肝灵片(广州白云山制药总厂，批号：4050001，4060001，070303，规格：38.5mg/片)。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为高纯水。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的制备精密称取105℃干燥3h后的水飞蓟宾对照品约10.34mg，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(质量浓度为206.8μg·mL-1)。2.1.2供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于水飞蓟宾10mg)，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀;精密吸取上清液5mL至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，作为供试品溶液。2.1.3阴性对照液的制备根据处方配制阴性对照品，按“2.1.2”项方法处理得阴性对照液。2.2测定方法由于水飞蓟宾对照品和供试品中都同时含有水飞蓟宾和异水飞蓟宾，因此按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积之和计算。2.3色谱条件及系统适用性试验色谱柱为DikmaDiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm，迪马公司);流动相：甲醇?1%冰醋酸溶液(体积比49∶51);流速：1.0mL·min-1;检测波长：288nm;柱温：30℃。分别取对照品溶液(水飞蓟宾质量浓度为12μg·mL-1)、供试品溶液和阴性对照溶液20μL注入色谱仪，理论板数以水飞蓟宾计算应不低于4000;水飞蓟宾的拖尾因子为0.94，保留时间约为25min，水飞蓟宾和异水飞蓟宾与其相邻色谱峰的分离度大于1.5;阴性样品不干扰样品测定，见图1。2.4方法学考察2.4.1标准曲线的制备分别吸取一定量的水飞蓟宾对照品贮备液，加甲醇稀释成水飞蓟宾质量浓度为20.68、31.02、41.36、51.70、62.04、82.72μg·mL-1的溶液。依次进样20μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积(A)对对照品溶液质量浓度(ρ)进行回归，得水飞蓟宾回归方程为A=667.95ρ+0.11，r=0.9999。表明水飞蓟宾质量浓度在20.68～82.72μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。2.4.2精密度试验取质量浓度为41.36μg·mL-1的水飞蓟宾对照品溶液20μL，连续测定5次，其峰面积的RSD值为2.0%，表明仪器精密度良好。2.4.3稳定性试验取供试品溶液(批号：070303)在0、2、4、6、8、12、24h分别进样20μL，记录峰面积，结果峰面积的RSD为1.1%，表明供试品溶液在24h内稳定。2.4.4重复性试验取同一批号(批号：070303)样品6份，照“2.1.2”方法处理并测定，结果水飞蓟宾平均含量为6.45μg·mL-1，RSD为1.5%，表明分析方法精密度良好。2.4.5加样回收试验精密称取同一批号样品(批号：070303)共6份，精密加入水飞蓟宾对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收