大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性研究.docx

编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第页共NUMPAGES8页第PAGE\*MERGEFORMAT8页共NUMPAGES\*MERGEFORMAT8页大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性研究任方奎何小燕李逐波*通讯作者：西南大学药学院，E-mail:[e-mail]（西南大学药学院，重庆北碚400716）来源：原作收稿：2009-11-21南宁兽药科技网上传时间：2009-12-1编辑:dongy大蒜新素是从大蒜（Alliumsativum）中提取的一种具有很强刺激性的挥发性油状物质，其化学名称为二烯丙基三硫醚，该化合物可以人工合成[1]。大蒜新素具有很强的抗菌[2]、抗病毒[3]、抗肿瘤[4]、抗癌[5]等多种药理活性。但大蒜新素在抗寄生虫方面的报道很少，LunZR等[6]曾报道大蒜新素可以治疗贾第虫病和有溶组织内阿米巴（Entamoebahistolytica）和滴虫性阴道炎（Trichomonasvaginalis）等疾病。目前为止，大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的研究还未见报道。本文主要研究大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性，测定半数致死时间（LT50）和半数致死浓度（LC50），并对大蒜新素及其衍生物的构效关系进行了初步探讨。1试验材料1.1供试动物自然感染螨病的家兔6只，雌雄兼有，平均体重2.0±0.5kg。由重庆市北碚区某兔场提供。1.2仪器与试剂倒置显微镜，20孔细胞培养板，挑虫针，大蒜新素（南通鑫利化工有限公司，批号：XY070705），二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚和二己烯三硫醚均有本实验室合成[7]，伊维菌素（河北威远动物药业有限公司），硫软膏（成都明日制药有限公司）。2方法2.1药品配制精密称取1.0g大蒜新素及其衍生物于10mL的容量瓶内，加0.1mL吐温-80用水定容至刻度，混匀，即得100mg/mL的储备药液，4oC冰箱中保存备用。精密称取0.25g的阿维菌素于10mL的容量瓶内，加0.1mL的吐温-80，用水定容至刻度，混匀，即得浓度为25mg/mL的阿维菌素，作为阳性对照液。取0.1mL的吐温-80于10mL的容量瓶内用水定容，作为阴性对照液。2.2离体杀螨试验[8][9]2.2.1痒螨的采集用小镊子剥取自然感染螨虫病家兔的耳道痂皮及脓血置平皿内，平皿边缘涂少量的硫软膏。置30oC温箱内保存30min使虫爬出，借助放大镜，用挑虫针挑取螨虫，在显微镜下对兔痒螨的形态学进行观察[10]，鉴定为兔痒螨。2.2.2杀螨活性的测定将试验分为药物组、阳性对照组和阴性对照组。药物组：在20孔细胞培养板的每孔各加入100mg/mL供试药物0.2mL。阳性对照组：20孔细胞培养板每孔各加入10mg/mL的阿维菌素0.2mL。阴性对照组：在培养板的每个孔中加0.2mL的阴性对照液。每组设置3个重复。每孔放置痒螨10只，在10×40倍显微镜下观察，分别记录螨的死亡时间。判定标准：虫体淋巴液流动，虫体不动但刺激有反应或长时间微弱颤动为麻醉；虫体淋巴液静止，虫体完全不动，刺激无反应，判定为死亡。2.2.3半数致死时间（LT50）的测定将大蒜新素及其衍生物的储备液用水稀释成浓度为20mg/mL，挑取10只螨虫置于20孔的细胞培养板中，每个孔加0.2mL药物，设置3个重复，同时以阴性对照液为阴性对照。给药后用显微镜观察，直至所有痒螨死亡，记录每个时段的死亡情况。2.2.4半数致死浓度（LC50）的测定将大蒜新素及其衍生物储备液先水稀释成4mg/mL,再倍比稀释成2.0mg/mL、1.0mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL和0.125mg/mL5个不同浓度，每个浓度设置3个重复，同时以阴性对照液为阴性对照。在培养板的试验孔中各加0.2mL不同浓度的药物,每孔挑入10只螨虫。将培养板放入测试环境(25oC，相对湿度为75%)，24h后镜检死亡情况。2.3统计分析根据机率值分析法，用Excel的卡方检验运算程序自动判断毒力回归方程的适合性与否[11]，计算出LT50和LC50。用SPSS12.0软件对试验数据进行多因素方差分析。3结果与分析3.1杀螨活性从表1中可以看出，100mg/mL的大蒜新素5min开始出现螨虫死亡，13min全部死亡，25mg/mL的阿维菌素5min开始出现螨虫死亡，17min螨虫全部死亡，可见100mg/mL的大蒜新素与25mg/mL的阿维菌素的杀螨活性差异显著（P<0.05）。从表1中可以看出，相同浓度下的大蒜新素衍生物的完全杀死螨虫所需要的时间长于大蒜新素，大蒜新素与二丁烯三硫醚，二己烯三硫醚之间的差异显著（P<0.05），与二戊烯三硫醚的差异不显著（P>0.05）。二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚与阿维菌素的差异不显著