总花色苷含量测定.doc

总花色苷含量测定总花色苷含量测定总花色苷含量测定总花色苷含量测定—分光光度法1、综合国内外资料，主要有以下几种计算吸光值A的方法［1］：（1)当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时，需消除叶绿素吸收含量的影响;此时，计算公式为：A=(Amax—A620）-0。1（A650-A620)（2）含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:a)直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质，花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。计算公式为：A=Amax直接法吸收光谱测定：用××分光光度计于250-800nm下全波长扫描，得到花色苷在0.1%盐酸—80％乙醇中的可见光区最大吸收波长，在此最大波长下测定各样品的吸光值A。b)pH示差法：在加工或储藏过程中，会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定，通常用pH示差法[8］。计算公式为：A=（Amax-A700)pH1.0—（Amax—A700)pH4。5pH示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内；然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0。025M，pH1。0)稀释，另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M，pH4.5）稀释,将稀释液平衡15min后，用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。2、花色苷总含量的测定［2]：通过波长扫描，确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。利用花色苷的结构特性，当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰，而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰，用示差法计算溶液中总花色苷含量。计算公式为:C(mg/g)=(A0—A1）×V×n×M/（ε×m）式中：A0、A1—分别为pH1。0、pH4。5时花色苷在λmax处的吸光值V-提取液总体积（mL）n—稀释倍数M—cy—3-glu（矢车菊—3—葡萄糖苷)的相对分子质量（449。4）ε-cy-3-glu的消光系数(29600)m—样品质量(g)3、花色苷含量TAcy的计算公式为（以天竺葵色素-3—葡萄糖苷计）［3］:TAcy（mg/hg）=(A×433×10×V）÷(22400×m）×100A=（OD500nm—OD700nm)pH1.0-（OD500nm-OD700nm)pH4.5式中:V—提取液的总体积（mL)m—取样量(g）22400-天竺葵色素-3—葡萄糖苷的摩尔消光系数433—天竺葵色素—3-葡萄糖苷的摩尔分子量。4、花色苷含量测定[4]样品处理：将各品种的干燥样品粉碎（40目）后,准确称取0。5g用10mL65％的酸性乙醇提取24h，提取3次，然后将3次提取液混合抽滤,真空旋转挥发回收乙醇，用蒸馏水定容到100mL，摇匀，静止备用。测定方法:含量测定用pH示差法，按照下面公式计算,测定3次取其平均值。C(mg/L)=（OD×M×DF×1000）/α×1式中：OD为吸光度，DF为稀释倍数,M为分子量，α=26900。花色苷[5]:将提取液稀释合适倍数，用1cm比色杯测其吸光值，参照Fuleki［6]的计算方法转换成总花色苷浓度，公式如下：C/（mg/mL）=（A×MW×DF×1000）/（ε×1)式中:A为吸光值；MW为分子量（以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准[7]，449。4)；DF为稀释倍数;ε为消光系数，26900L.cm—1。mg-1。参考文献[1］霍琳琳，苏平，吕英华，分光光度法测定桑葚总花色苷含量的研究［J］.酿酒,2005年7月，第32卷第4期.［2]李颖畅,孟宪军，张琦，于娜，蓝莓果主要物质含量及处理方式对其花色苷的影响［J]。食品工业科技，Vol.29，No.05，2008。［3］盛小娜,王璋，不同预处理方式对速冻草莓花色苷含量的影响［J].冷饮与速冻食品工业，2006年12月第12卷第4期.［4]王振江，肖更生，廖森泰等,不同品种桑椹的抗氧化作用与其花色苷含量的相关性研究[J]。蚕业科学，2006，32(3)。[5]吕英华，苏平,那宇，李辉,桑椹色素体外抗氧化能力研究[J］.浙江大学学报（农业与生命科学版）33(1）：102～107,200［6]FulekiT,FrancisFJ．Quantitativemethodsforanthocyanins．1．Extractionanddetermine-ationoftotalanthocyaninincranberries．D]．FoodSei．，1968。33:72-78[7]SuhHJ，NohD0，KangCS，eta1．ThermalkineticsofcolordegradationofmulberryfruitextractD]．Nah