大鼠胚胎背部皮肤发育过程中毛囊干细胞的发育初探.docx

大鼠胚胎背部皮肤发育过程中毛囊干细胞的发育初探【摘要】目的探讨大鼠胚胎背部皮肤毛囊干细胞的发育规律。方法使用冰冻超薄切片后固定，结合免疫组织化学染色方法，显示出毛囊干细胞的位置和发育程度，然后对医学阳性程度表达区域使用软件分析和统计方法处理。结果大鼠胚胎背部皮肤呈现逐渐增厚的趋势，其中毛囊隆突区并不明显，但可明显观察到三种干细胞标记物在皮肤全层，尤其是基底层的表达变化。结论形态学观察说明毛囊发生初期毛囊干细胞(hairfolliclestemcell,HFSC)不仅仅定位于毛囊上段，三种HFSC标志物的表达有差异。背部皮肤基底层细胞具有干细胞特性，未分化为表皮细胞或者毛囊中的各种细胞。β1integrin，CD34和K15的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关。【关键词】大鼠胚胎；背部皮肤；毛囊干细胞【Abstract】ObjectiveTodetectthedevelopmentofhairfolliclestemcellindevelopmentalratembryodorsalskin.MethodsFrozensectionandimmunohistochemistrywereusedtoinvestigatetheexpressionofβ1integrin,CD34andK15.AlltheexpressiondatawasdetectedbysoftwarecalledImageproplus,andthenthedatawasanalyzed.ResultsEmbryodorsalskinbecamethickergraduallywithoutbulgeregionsignificant,buttheexpressionofstemcellmarkers,β1integrin,CD34andK15changedobviouslyineachstageofdevelopmentalratdorsalskin.ConclusionTheresultsofmorphologysuggestthathairfolliclestemcells(HFSCs)donotlocalizeinupperhairfollicleinearlystageofhairfolliclemorphogenesis.Theexpressionsofthreestemcellmarkersweredifferent.Especially,basallayercellsindorsalskinexhibitedstemcellcharacteristicswithoutdifferentiatingintoepithelialcellsorothertypesofcellinhairfollicle.Theexpressionofstemcellmarkersmaybecorrelatedwithcharacteristicsofhairfollicleandhairfolliclestemcells.【Keywords】ratembryo;dorsalskin;hairfollicle;hairfolliclestemcell皮肤上皮层及其相关结构来源于毛囊内部和毛囊间的两个干细胞群落，即皮肤基底层干细胞通常形成皮肤各层，而位于毛囊隆突区的干细胞则负责毛发和皮脂腺的再生［1］。进入生长周期的毛囊可分为四个阶段，即生长期(anagen)、退化期(catagen)、静止期(telogen)和活跃脱毛期(exogen)［2,3］。而进入周期之前，毛囊经历发育阶段。促使毛囊发生的第一个信号来源于间充质［4,5］，随后表皮增厚形成基板，真皮细胞在基板下形成结构紧密的微环境，基板向下生长形成毛胚芽，上皮组织包围真皮紧密微环境从而形成真皮乳头。大鼠毛囊的形成经历胚胎第d()～初生阶段(～E22)，本文据此选择胚胎发育第15d(E15)、E16、和E19四个阶段以观察大鼠胚胎发育过程中背皮中干细胞标志物β1integrin,CD34和K15的表达规律，以此解释毛囊干细胞(hairfolliclestemcell,HFSC)在大鼠胚胎背皮中的发育规律。1材料和方法材料近交系Wistar大鼠胚胎(由第三军医大学实验动物中心提供)。CD34兔抗、β1integrin兔抗(武汉博士德)，K15兔抗(Novocastra)，免疫组化试剂盒(北京中山)。实验方法第15d(E15)、E16、和E19四个阶段的背部皮肤。随机抽取每阶段大鼠胚胎6个，剪下每个阶段大鼠胚胎的背部皮肤，分置于液氮中待用。样品放入4%PFA中固定24h后放入30%蔗糖溶液中脱水40h左右，于冰冻切片机中OCT包埋剂包埋，切成5μm厚组织片。采用免疫组化染色ABC法检测大鼠胚