大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用.docx

大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用【摘要】目的观察大黄虫丸经旁分泌途径对大鼠肝星状细胞增殖及其表达TGF-β1基因的影响。方法采用Nycodenz分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CCl4损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞和星状细胞。在制备正常鼠血清和大黄虫丸药物血清的基础上，将它们分别加入KC培养板内作用48h后制备成正常鼠KC条件培养液和损伤鼠KC条件培养液。将NKCCM和KCCM作用于活化的HSC24h后，采用MTT法和3H-TdR掺入法检测HSC增殖的变化；采用半定量RT-PCR法扩增TGF-β1mRNA以检测HSC表达TGF-β1基因的情况。结果旁分泌组各组的HSC增殖幅度及TGF-β1基因的相对表达量较正常对照组NKCCM组均明显增加。同时旁分泌组中，含药血清作用的5%，10%和20%KCCM组较无药物血清作用的0%KCCM组HSC的增殖能力及TGF-β1基因的相对表达量则下降，且随药物浓度的升高逐渐降低，其组间差别有学意义。结论大黄虫丸可明显抑制经旁分泌途径活化的大鼠HSC的增殖及TGF-β1基因的表达，且其抗肝纤维化效应与药物剂量间存在一定的依赖关系。【关键词】大黄虫丸肝纤维化肝星状细胞旁分泌Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofDahuangZhechongPillontheproliferationofrathepaticstellatecells(HSCs)activatedbyparacrinepathwayandtheexpressionoftransforminggrowthfactor-beta1(TGF-β1)CCl4-injuredandnormalratKupffercells(KCs),hepaticstellatecellswereseparatedbynon-continuousdensitygradientcentrifugationofNycodenzmedium.Afterthecommonratandthedrugseraprepared,theywereaddedrespectivelyintoKupffercellcultureplatesfornormalKupffercellsconditionedmedium(NKCCM)andinjuredratKupffercellsconditionedmedium(KCCM)after48h.WeobservedthechangesofproliferativeHSCsbythemethodsofMTTand3H-thymidine(3H-TdR)incorporationassay,andtheexpressionofTGF-β1geneinHSCsbysemi-quantitativeRT-PCRwhenHSCswereactivedfor24hbythoseconditionedallparacrinegroups,themultiplicationofHSCsandtherelativeexpressionofTGF-β1genewereincreasedmarkedlycomparedtonormalcontrolgroup(P＜orP＜),andgraduallydecreasedinalldrugandnodrugserumgroupswithelevateddrughadsignificantdiferencesamongallZhechongPillcanobviouslyinhibittheproliferationofratHSCsactivatedbyparacrinepathwayandtheexpressionofTGF-β1geneinHSCsanddeereasehepaticfibrosisinaconcentration-dependentmanner.Keywords：DahuangZhechongPill;Liverfibrosis;Hepaticstellatecell;Paracrine肝纤维化是从各型慢性肝病转化为肝硬化的一个重要病变过程，有效逆转肝纤维化已成为防治肝硬化的重要手段。它是一个伴随肝内细胞外基质增多和沉积的瘢痕化过程，在细胞和分子水平上以HSC的活化、转化生长因子β1及其下游细胞调节因子活性异常为主要特征［1］。因此，抑制HSC活化和减少肝内TGF-β1的表达是逆转肝纤维化的中心环节。大黄虫丸具有缓中补虚、活血化瘀、通络软坚等功效，以往的和实验研究表明该药在防治肝纤维化方面效果明显［2，3］。本实验拟观察大黄虫丸对CCl4损伤大鼠肝组织内经旁分泌途径活化的星状细胞的增殖和TGF-β1基因表达情况的影响，进一步探讨该