大孔吸附树脂纯化马钱子总生物碱的工艺研究.docx

大孔吸附树脂纯化马钱子总生物碱的工艺研究【摘要】目的研究大孔树脂纯化马钱子总生物碱的工艺条件，为马钱子总生物碱的工业化生产提供实验依据。方法以吸附量及解吸率为指标考察了AB-8,D101,HPD-500和LSA-10等4种型号的树脂,确定纯化马钱子总生物碱的最佳树脂。并通过单因素分析考察该树脂分离、纯化马钱子总生物碱的最佳工艺条件。结果AB-8型大孔吸附树脂对马钱子总生物碱具有较好的分离能力。通过大孔树脂分离纯化后,马钱子样品总生物碱的纯度可达70%,洗脱率可达到90%以上。结论AB-8大孔吸附树脂综合性能较好,适合于马钱子总生物碱的分离纯化。【关键词】马钱子总生物碱大孔吸附树脂纯化马钱子为马钱科植物马钱Strychnosnux-vomicaL.的干燥成熟种子［1］，具有通络止痛、散结消肿的功效，在我国有悠久的药用历史，疗效显着、确切，为历代医家所推崇。现代研究证明其主要含总生物碱。因此,分离纯化马钱子总生物碱具有重要的意义。大孔吸附分离技术是目前应用较广的一种中药深加工技术,具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点［2］，已被广泛应用于中草药有效成分的分离纯化。但马钱子总生物碱的大孔吸附树脂的富集,分离和纯化尚未见报道。本实验选择4种大孔吸附树脂分离马钱子总生物碱，以士的宁和马钱子碱为定量指标，筛选出最佳的树脂、洗脱溶剂及用量，以达到开发相应制剂的要求。1仪器与试药Waters2695-2996高效液相色谱仪，含有在线脱气、高压四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Empower色谱工作站；HY-4型调速多用振荡器；AB265-S电子分析天平为色谱纯;水为娃哈哈纯净水；其它试剂均为分析纯。士的宁、马钱子碱对照品；大孔吸附树脂AB-8、D101；LSA-10；流动相为甲醇水乙酸三乙胺；流速1.0ml/min；检测波长254nm；柱温30℃。标准曲线的绘制精密称取士的宁对照品6mg，马钱子碱对照品5mg定容置同一25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。分别精密移取，，，，ml至10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀。精密吸取10μl,注入液相色谱仪。以峰面积(A)为纵坐标,对照品浓度(C)为横坐标作图,得标准曲线。回归方程为:士的宁A=-87369+22961C，r=8马钱子碱A=-69869+12255C，r=7结果表明,士的宁浓度在24～120μg/ml,马钱子碱浓度在20～100μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系。样品溶液制备马钱子药材用6倍量pH=5,50%的乙醇溶液提取3次,回流提取2h/次,合并3次滤液，抽滤。减压浓缩回收至无醇味,加水稀释到适当浓度备用。大孔吸附树脂静态吸附和解吸试验考察树脂预处理大孔树脂分别用95%乙醇浸泡24h,充分溶胀,用乙醇洗至溶液加适量蒸馏水无白色浑浊现象时为止,最后用蒸馏水洗至无醇味,备用。静态吸附容量测定精密量取预处理好的4种大孔吸附树脂1g加入马钱子样品液30ml中,密封置于振荡器(25℃,100次/min)中振荡，充分吸附,12h后从上清液中取样,检测溶液中总生物碱含量的变化,计算饱和吸附量。结果见表1。静态解吸试验分别将上述充分吸附了马钱子总生物碱的4种树脂进行过滤,除去水液,再将其置于具塞锥形瓶中,加入95%乙醇溶液30ml密封,置恒温振荡器中进行解吸,12h后从上清液中取样,检测总生物碱含量变化,计算解吸率。结果见表1。饱和吸附量=［(初始浓度-吸附后浓度)×吸附液体积］/树脂重量解吸率(%)=［洗脱液浓度×洗脱液体积］/饱和吸附量×100%由表1中数据可见,树脂AB-8对马钱子中总生物碱的吸附、解吸附性能最优,所以选择AB-8型树脂对马钱子进行纯化。表14种大孔树脂的静态饱和吸附量及解吸率静态吸附动力学特征取AB-8树脂1g加入100ml(g生药/ml)马钱子样品溶液中，室温条件下静置12h,使其达到饱和吸附,静置期间，每隔一定时间吸取上层液测定士的宁、马钱子碱的含量。以吸附时间为横坐标，吸附量为纵坐标，绘制吸附动力学曲线，见图1。可见，各成分在起始阶段吸附速率较大，2h后士的宁、马钱子碱含量增加缓慢。AB-8树脂对纯化马钱子总生物碱的工艺研究最大上样量的考察将一定浓度的马钱子样品液150ml缓慢加入装有15mlAB-8树脂的玻璃柱中,流速为1.0ml/min,每树脂床体积洗脱剂浓度的考察将4份各已吸附好5ml马钱子提取液(1g生药/ml)的AB-8树脂10ml，先用水洗至无色，再分别用30%，50%，70%，90%的乙醇溶液作为洗脱液,洗脱5倍柱体积,洗脱液流速为1.0ml/min。以士的宁、马钱子的含量为评价指标,测定结果见表3。可见，生物碱含量随乙