妇科再造丸对中波紫外线照射所致豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用.docx

妇科再造丸对中波紫外线照射所致豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用【摘要】目的研究妇科再造丸对皮肤色素沉着的作用，并探讨其部分作用机理。方法应用白色豚鼠经中波紫外线照射诱导皮肤色素沉着动物模型，用HMB45为一抗，以免疫组化方法显示表皮中的黑色素细胞，检测黑色素细胞个数及其平均灰度值。结果妇科再造丸高、中、低3个剂量组与模型组比较，均能减少黑色素细胞个数并增加其平均灰度值。结论妇科再造丸对黑色素细胞增殖有一定的抑制作用。【关键词】妇科再造丸;中波紫外线;色素沉着;黑色素细胞Abstract：ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectofFu-Ke-Zai-ZaoPillonpigmentationinducedbyUVBandinvestigateitsmechanism.MethodsThechangesofnumberandmeangradationofmelanocytesinducedbyUVBwereobservedintheexperimentalhypermelanosismodel(whiteguineapig).ResultsDecreasednumberandincreasedmeangradationofmelanocyteswerefoundinthreegroupsofFu-Ke-Zai-ZaoPillcomparedwithmodelgroup().ConclusionFu-Ke-Zai-ZaoPillcaninhibitmelanocyticproliferation，whichmaybemakeitvalidintreatingskinpigmentation.Keywords：Fu-Ke-Zai-ZaoPills;UVB;Pigmentation;Melanocyte皮肤色素沉着是临床常见疾病，发病人群广泛，尤其对于女性，在影响容貌的同时还会造成心理压力。其发病机制主要是由于皮肤中黑色素细胞增多、合成黑色素能力增强［1］。妇科再造丸为一复方中药制剂，由当归、熟地、白芍等四十余味中药材组成，临床应用已有几十年之久。本实验通过建立中波紫外线诱导豚鼠皮肤色素沉着模型，观察了妇科再造丸对黑色素细胞的作用，旨在为该药的进一步开发利用提供科学的理论依据。1器材与方法1动物雌性白色豚鼠，体重g，合格证号：SCXK2002-0001，由贵阳医学院实验动物中心提供。2试剂妇科再造丸丸剂，维生素C，维生素E胶囊，黑素瘤抗体试剂盒。3仪器SS-01A型紫外线光疗仪〔光谱nm，辐照强度mW/cm2，上海希格玛高技术有限公司〕，Biomias99图像分析系统。4方法［2，3］豚鼠48只，按体重随机分为6组，每组8只：妇科再造丸高、中、低3个剂量组，阳性对照组［4］，正常对照组及模型组(蒸馏水6ml·kg-1·d-1)。除正常对照组外，其余5组用乌拉坦腹腔注射麻醉，剪净背部中心被毛，使用紫外光疗仪照射每只豚鼠背部中心30min，照射总量达到5700mJ/cm2。照射次日开始灌胃给药，连续3周。3周后处死动物，取豚鼠照射区域去毛皮肤一块，正常组豚鼠取相应区域去毛皮肤一块，中性福尔马林固定。常规石蜡包埋切片，用黑素瘤鼠抗人单克隆抗体(HMB45)为一抗，采用免疫组化方法显示表皮中的黑色素细胞。5检测指标［5］光镜观察HMB45染色阳性的黑色素细胞密度及着色深浅，并通过Biomias99图象分析系统，检测切片上黑色素细胞个数及平均灰度值。采用Excel2003统计软件进行组间T-test分析。2结果光镜观察正常对照组豚鼠表皮的基底层细胞间，可见到较少的HMB45标记阳性的黑色素细胞，着色不是很深。模型组HMB45标记阳性的黑色素细胞明显增多，成簇分布于表皮基底层细胞间，并且着色很深，呈强阳性反应。妇科再造丸3个剂量组及阳性对照组中黑色素细胞数均有减少，着色变浅，其中以妇科再造丸高剂量组尤为明显，见图3。对豚鼠皮肤中黑色素细胞个数及平均灰度的作用结果显示，正常对照组豚鼠表皮基底层细胞间，HMB45染色阳性的黑色素细胞较少，着色也较浅；而模型组豚鼠表皮基底层细胞间HMB45染色阳性的黑色素细胞量多密集，并且着色较深。灰度反映物体颜色的深浅度，颜色越浅，灰度值越高。与模型组比较，妇科再造丸高、中、低3个剂量组均能不同程度的减少黑色素细胞个数并增加其平均灰度值。结果见表1。表1黑色素细胞个数及平均灰度3讨论色素沉着诱因很多，如长期日晒、遗传、内分泌失调等。据文献报道，中波紫外线能引起黑色素细胞数目增多、黑色素合成增加等细胞功能状态的变化，是引起皮肤色素沉着增加的根本原因［6］。在黑色素的生成中，酪氨酸酶起着至关重要的作用，是黑色素合成过程中的限速酶，其表达和活性决定着黑色素生成的量和速度。因此如果酪氨酸酶的活性受到抑