激光照射联合复合多糖对荷瘤小鼠瘤增殖的影响.docx

激光照射联合复合多糖对荷瘤小鼠瘤增殖的影响［摘要］目的探讨低能量激光照射联合龙葵多糖对荷肝癌小鼠肿瘤增殖的影响。方法建立荷肝癌小鼠皮下种植瘤模型，将荷瘤小鼠随机分为5组，连续治疗10天后将小鼠处死。原位杂交法检测瘤组织血管内皮生长因子mRNA表达；免疫组化法检测瘤组织中细胞增殖核抗原Ki67的表达。结果低能量激光照射联合龙葵多糖可以抑制肿瘤细胞增殖及血管生成，显着下调VEGFmRNA、Ki67的表达。结论低能量激光照射联合龙葵多糖能抑制肿瘤细胞的增殖及血管生成、抑制荷肝癌小鼠肿瘤的生长。［关键词］低能量激光照射；龙葵多糖；增殖Effectsoflaserirradiationsolanumnigtumpolysaccharideontumorgrowthincancerloadedmice［Abstract］ObjectiveTostudyeffectsoflowenergylaserirradiationcombinedsolanumnigtumpolysaccaridesontumorgrowthinlivercancerloadedEstablishedlivercancerloadedmousemodelanddividedrandomlymiceintofivecalculatedthetumorinhibitoryrateandspleendetectedtheexpressionofVEGFmRNAbyinsituhybridizationandKi67proteinbyimmuneLowenergylaserirradiationcombinedsolanumnigtumpolysaccharidecouldinhibittumorgrowthandangiogenesis，theexpressionofVEGFmRNA，Ki67proteinwereLowenergylaserirradiationcombinedsolanumnigtumpolysaccharidecanobviouslyinhibittheproliferationoflivercancercellsandangiogenesis，soinhibitthegrowthofthelivercancerinmice.［Keywords］lowenergylaserirradiation；solanumnigtumpolysaccharide；cellsproliferation本实验用低能量激光照射联合龙葵多糖来治疗荷瘤小鼠，观察其对肿瘤细胞增殖及血管生成的影响，以期探讨低能量激光照射联合龙葵多糖抑瘤作用的机制。1材料与方法实验材料实验药物的配制龙葵多糖：用纯度为100%的龙葵多糖200mg溶于生理盐水50ml中，过滤除菌，4℃保存。5-氟尿嘧啶：g/10ml，南通制药总厂生产。细胞株肝癌细胞H-22由北京大学肿瘤研究所引进。实验动物昆明种小鼠50只，内蒙古大学动物实验中心购买。鼠龄为4~5wk，体重18~22g，雌雄各半。实验方法肝癌细胞系复苏培养将肝癌细胞H-22复苏，收集细胞放入生理盐水1ml中混匀，并等分两份，取2只小鼠，每只腹腔注射肝癌细胞ml进行培养，1周后取小鼠腹水制备模型。制备小鼠皮下荷瘤模型取肝癌小鼠腹水约10ml，用生理盐水按1∶2稀释成细胞悬液，调节细胞浓度为×107个/ml，按ml/只接种于小鼠右腋皮下，将50只小鼠随机分为五组。NS组：ml/(只·天)灌胃。低能量激光照射组：激光照射小鼠10min/(只·天)、剂量J/龙葵多糖组：2mg/ml/(只·天)灌胃。(4)低能量激光照射联合龙葵多糖组：激光照射小鼠10min/(只·天)、剂量J/(cm2·只·天)、龙葵多糖2mg/5-FU组：mg/、组用激光照射小鼠脾区(脱毛)，激光照射距离30cm，每日1次，每次照射10min，同时各药物组相应灌胃给药，照射、给药10次结束后24h处死小鼠。病理组织学观察处死荷瘤鼠后30min内取瘤组织、脾脏等脏器，10%中性甲醛固定后，常规石蜡包埋，5μm切片，HE染色，光学显微镜下低倍、高倍观察。原位杂交法检测瘤细胞VEGFmRNA表达采用VEGFmRNA原位杂交试剂盒，检测瘤组织VEGFmRNA表达。免疫组化法检测瘤组织Ki67抗原表达采用免疫组化S-P法检测。按照试剂盒说明书进行操作。统计学方法实验数据应用SPSS软件统计，多组间比较采用方差分析，组间两两比较用q检验。2结果肿瘤组织切片光镜观察NS组肿瘤细胞数增多，呈异质性，核大深染，出现较多核分裂象，可见血管形成增多。激光照射联合龙葵多糖组瘤细胞减少，细胞体积缩小，有较多的核固缩，淋巴细胞浸润，血管形成明显减少。原位杂交法检测瘤细胞VEGFmRNA的表达VEGFmRNA阳性反应