槲皮素铜(Ⅱ)配合物清除自由基活性的研究.docx

槲皮素铜(Ⅱ)配合物清除自由基活性的研究【摘要】目的研究槲皮素铜(Ⅱ)配合物的抗氧化作用。方法采用DPPH法和NBT法分别测定了槲皮素铜(Ⅱ)配合物对二苯代苦味肼基自由基和超氧阴离子的清除作用。结果槲皮素铜(Ⅱ)配合物能有效清除DPPH·和O2-·，其清除能力均强于单独的槲皮素。结论槲皮素铜(Ⅱ)配合物是一种较强的自由基清除剂，具有较高的SOD活性。【关键词】槲皮素；铜(Ⅱ)配合物；自由基；抗氧化作用Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantioxidantpropertiesofquercetin-Cu(II)complexes.MethodsTheantioxidantpropertiesofquercetinCu(Ⅱ)complexeswereevaluatedbytheDPPH·radicalandsuperoxidescavengingactivities.ResultsThequercetinCu(Ⅱ)complexesshowedstrongantioxidantactivities,andbothitsDPPHscavengingactivityandsuperoxideanionradical-scavengingactivitywerebetterthanthoseofquercetinalone.ConclusionThequercetin-Cu(Ⅱ)complexesactsasastrongradicalscavengerandhashighSODlikeactivities.Keywords：Quercetin；Cupriccomplexes；Freeradical；Antioxidation槲皮素广泛存在于植物界，大约68%的植物中都含有。槲皮素药理作用广泛，具有降血压、降血脂、扩张冠状动脉、抗血小板聚集、抗炎、抗过敏、抗氧自由基和抗心律失常等多种生物活性及药理作用［1～3］。根据中药配位化学原理，中药有机成分与微量元素结合后往往会提高其生物活性或产生新的生物活性［4］。槲皮素对金属离子具有强烈的螯合作用，生成的配合物往往具有较强的荧光，所以槲皮素常用于金属离子的荧光分析［5，6］。近来研究表明槲皮素与Fe，Pb，Cd等金属离子形成配合物后生物活性和药理作用明显增强［7，8］，这对天然药物的开发利用开辟了新的途径。本文研究了槲皮素铜配合物清除DPPH·自由基和超氧阴离子的作用，初步探讨了配合物与O2-·的反应机理。1材料与方法试剂与仪器二苯代苦味肼基自由基、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、氯化硝基四唑氮蓝均为Sigma产品。槲皮素购于成都超人植化有限公司。槲皮素铜配合物按文献［9］提供的方法合成，所有其它试剂均为分析纯。756MC型紫外可见分光光度计，石英比色皿。体外清除DPPH·自由基的作用DPPH用无水乙醇配制成mmol/L的溶液，临用时稀释。DPPH溶液的浓度在mmol/L～mmol/L范围内与其在517nm处的吸光度线性相关，其线性回归方程为：A=-1，r2=1。样品溶液用1∶1的DMF-乙醇溶液配制，在ml的DPPH溶液中加入ml不同浓度的样品溶液。于室温下反应30min，在517nm下测定吸光度Ai。以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为Amax，相应样品溶液的吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。DPPH自由基的清除活性按下式计算：DPPH·Scavenging(%)=(1-Ai-A0Amax)×100%半数清除浓度根据实验结果计算。体外清除超氧阴离子的作用ml样品溶液加到含有mmol/L黄嘌呤、mmol/LNBT的pH=的mol/L磷酸盐缓冲体系中，然后再加入黄嘌呤氧化酶溶液1ml混合均匀。反应混合物在37℃水浴中反应20min。然后加入2ml69mmol/L的十二烷基苯磺酸钠溶液终止反应，在560nm下测其吸光度Ai，以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。O2-·清除活性按下式计算：O2-Scavenging(%)=Ai-A0Amax×100%半数抑制浓度根据实验结果计算。2结果槲皮素铜配合物体外清除DPPH·自由基的作用DPPH·是一种稳定的自由基，其乙醇溶液显紫色，在517nm处有最大吸收。当有自由基清除剂存在时，DPPH·的单电子由于被配对，DPPH·浓度减小而使其颜色变浅，在517nm波长处的吸光度会减小。从图1可以看出，槲皮素铜配合物具有显着的清除DPPH·自由基的能力，随着浓度的增加，清除率也呈明显上升趋势，呈现量效关系。槲皮素铜配合物对DPPH·自由基的清除能力高于单独的槲皮素。根据实验结果，槲皮素铜配合物和槲皮素的EC50分别是，μmol/L。槲皮素铜配合物体外清除超氧阴离子的作用