反相高效液相色谱法测定岩黄连药材中岩黄连碱的含量.docx

反相高效液相色谱法测定岩黄连药材中岩黄连碱的含量【摘要】目的建立岩黄连药材中岩黄连碱的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，以乙腈∶水为流动相，流速为1ml/min,检测波长为347nm，柱温20℃，进样量为20μl,外标法计算含量。结果岩黄连碱在4～μg内峰面积与对照品的进样量呈良好的线性关系，其回归方程为Y=2×106X-5(r=98)。平均回收率分别为%,%,%，RSD分别为%，%，%。结论所建立的RP-HPLC含量测定方法简便、准确、专属性强、重现性好。为控制药材岩黄连质量标准提供了依据。【关键词】岩黄连碱反相高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTodevelopanewmethodfordeterminationofthecontentofdehydrocavidineinCorydalissaxicolacontentofdehydrocavidineinC.saxicolaBuntingwasdeterminedbyRP-HPLC，usingacetonitrile-water(V∶V＝50∶50,％potassiumdihydrogenphosphateand%sodiumlaurylsulfate)asmobilephase,1ml/min,with347nmofdetectionwavelength,thetemperaturewas20℃.Theinjectionvolumewas20μlandtheexternalstandardwasused.ResultsThelinearrangewaswithin4～μgandthecorrelationcofficientwasaveragerecoveryandRSDwere%，%，%and%，%，%,methodissimple,accurate,specificandprecised.ItissuitableforthethequalitycontroloftheCorydalissaxicolaBunting.Keywords：Dehydrocavidine;RP-HPLC岩黄连CorydalissaxicolaBunting，又名石生黄堇，紫堇科紫堇属多年草本植物［1～3］。具有显着的抗菌、消炎、镇痛和安定作用，是桂西北山区常用消炎止痛、排毒、治疗急慢性肝炎和肝硬化等疾病的一种中草药［2，3］，其化学成分含有［4］：脱氢卡维丁(dehydrocavidine),小檗碱，(±)cavidine，(±)thalictrifoline,dehydrocavidine，(-)13β-hydroxystilopine，(+)四氢巴马汀［(±)tetrahydropalmatine］，(-)斯库来碱［(-)scoulerine］，白屈菜红碱，(-)四氢非洲防己胺［(-)tetrahydrocolumbamine］，原阿片碱,卡维丁,延胡索甲素等多种生物碱，其主要活性成分为岩黄连碱，生物碱含量高低直接影响药材质量和疗效。岩黄连植物分布局限于石灰岩山区，属石山特有种［3］。目前，国内外对岩黄连的研究主要集中在岩黄连总生物碱的成分分析［5］，引种栽培［2～6］和药理作用［7～10］的研究，而对不同地区的岩黄连中岩黄连碱含量差异的研究未见报道。本实验主要建立了岩黄连中岩黄连碱含量测定方法，并对不同地区的岩黄连中岩黄连碱含量进行测定，为岩黄连质量考查提供参考，这对于指导岩黄连的标准化种植及合理采收具有重要意义。1仪器与试药仪器LC-9000D高效液相色谱仪，SartoriusME215S(德国赛多利斯)电子天平，B3200S超声处理器,RE-52A型旋转蒸发仪。试剂乙腈(色谱纯,美国TEDIA公司,Lot506126),甲醇(色谱纯,天津四友生物医学技术有限公司)，磷酸二氢钾，十二烷基硫酸钠，水为高纯水，HCl,氨水，氯仿。试药岩黄连碱对照品；药材岩黄连供试品。2方法与结果色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈∶水为流动相，检测波长为347nm，理论塔板数按岩黄连碱峰计算应不低于6000。对照品溶液的制备准确称取岩黄连碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升含25μg岩黄连碱的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品约10g，剪碎，加入20倍量1％HCl溶液，煎煮30min，取水提液，药渣再重复上一步骤，过滤，合并两次水提液，加氨水调pH至10，析出沉淀，过滤得清膏，80℃干燥2h，加入20倍量氯仿回流提取30min，过滤，得黄绿色澄清液体，将滤液减压蒸馏，挥干氯仿，精密加入ml流动相超声溶解，μm微孔滤膜滤过，取续滤液，稀释25倍(取1ml用流动相定容至25ml容量瓶)，即得。阴性对照溶液的制备以项的流动相为阴性对照溶液。阴性干扰实验