微波辅助提取野菊花中总黄酮的工艺研究.docx

微波辅助提取野菊花中总黄酮的工艺研究【摘要】目的对微波辅助提取野菊花总黄酮的工艺条件及参数进行优化。方法在单因素实验的基础上,采用L9(34)正交设计,以野菊花总黄酮的提取率为指标,探讨料液比、微波辅助提取时间、乙醇浓度、微波功率对提取率的影响。结果最佳提取工艺参数为:料液比1∶50，提取时间9min，乙醇浓度(φ)=60%，微波功率340W。在上述最优条件下进行了精密度和回收率实验,所得结果的相对标准偏差为%(n=6),回收率在%～%之间。结论采用微波辅助提取野菊花总黄酮工艺简单可行,为进一步的工艺开发提供了参考。【关键词】野菊花;总黄酮;微波辅助提取;正交实验野菊花是菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的干燥头状花序。近年来研究表明，野菊花含有黄酮类物质。黄酮类化合物是自然界中广泛存在的一类天然产物，药研究表明其具有抗炎、抗氧化[2，3]、抗过敏作用以及降低血液和肝脏中胆固醇的作用。提取黄酮的方法有：热水提取法、有机溶剂提取法、碱液提取法、超声波辅助提取法、超临界流体提取法、大孔树脂吸附法、酶法提取等。但对野菊花总黄酮的微波辅助提取研究报道较少。微波提取技术利用微波能快速破坏细胞壁加快活性成分的溶出，而且使许多难溶物质在微波电磁场的作用下得到较好的溶解，从而提高了提取的速度和产率[7～10]。与常规方法比，微波提取具有选择性高、快速高效、溶剂消耗少、活性成分提取率较高、不产生噪音、适合于热不稳定物质的提取等特点[11，12]。为更有效地开发和利用野菊花药材资源，充分提取野菊花中所含的总黄酮成分，本文采用正交设计的方法进行了微波辅助提取工艺研究，以期改善传统的浸提方法，为进一步的开发利用提供参考。1材料与仪器材料芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);野菊花(广州致信中药饮片有限公司)购自广东药学院附属门诊部药房;实验用水为双蒸水;所用试剂均分析纯。仪器MSP-100E微波提取仪(北京雷明科技有限公司);U3010紫外可见分光光度计(日本日立公司);722型光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);FZ102微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);HH-6电子恒温水浴锅(苏州威尔试验用品有限公司);FA2104电子分析天平(上海天平仪器厂)。2方法与结果标准曲线的制备称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品0g，置于100ml量瓶中，加乙醇70ml，置于水浴上微热使溶解，冷却至室温，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置于100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得0.2mg/ml芦丁对照品溶液。精密量取对照品溶液，，，，，，，ml，分别置25ml量瓶中，加乙醇至6ml，加ρ(NaNO2)=5%亚硝酸钠溶液ml，混匀，放置6min，加ρ[Al(NO3)3]=10%硝酸铝溶液ml，摇匀，放置6min，加ρ(NaOH)=5%氢氧化钠试液ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min。以乙醇为参比，用1cm比色皿，于U3010紫外可见分光光度计上，在400～600nm波长处进行扫描。结果表明，对照品溶液在510nm处有最大吸收，因此选择510nm作为测定波长。在510nm波长处测定体系的吸收度，以吸收度(A)为纵坐标、浓度ρ芦丁(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=ρ芦丁+28(r=4)。结果表明，芦丁对照品在所试浓度～μg/ml范围内呈良好的线性关系。提取溶剂的选择水提取称取野菊花粉末0g于特制的微波提取罐中，加水40ml，浸泡30min后，控制一定压力，在微波功率255W下提取9min。趁热过滤至100ml容量瓶中，药渣用少量水洗涤3次，每次过滤。并入滤液，冷却，用水定容后备用。乙醇提取称取菊花粉末0g于特制的微波提取罐中，加φ=50%乙醇40ml，混匀，浸泡30min后，控制一定压力，在微波功率255W下提取9min。趁热过滤至100ml容量瓶中。药渣用少量乙醇洗涤3次，每次过滤。并入滤液，冷却，用乙醇定容后备用。样品液总黄酮含量测定移取样品液ml于25ml容量瓶中，按标准曲线制备方法进行操作、显色，测定吸光度，由标准曲线得到样品中总黄酮含量。结果见表1。由表1可知，以乙醇作溶剂的提取法优于以水为溶剂的提取法。用水做溶剂提取黄酮虽然存在生产成本低，无溶剂残留的优点，但存在提取率较低，提取液存放易腐败变质，后续的过滤、浓缩操作困难且费时等不足，因此本实验选择乙醇作为提取溶剂。表1提取溶剂与总黄酮产率的关系微波辅助提取单因素实验称取一定量的野菊花粉末，按照“”项实验方法，采用单因数变换法分别试验料液比、微波辐射时间、乙醇浓度、微波辐射功率对野菊花总黄酮提取率的影响。料液比对野菊花总黄酮提取率的影响以φ=50%乙醇为提取溶剂，微波功率255W，在微波辐射时间为9min时，试验不同料液比对野菊花总黄酮提取率