平喘合剂抑制哮喘模型大鼠气道炎症的实验研究-.docx

平喘合剂抑制哮喘模型大鼠气道炎症的实验研究*【摘要】目的通过动物实验，探讨平喘合剂治疗儿童哮喘的作用机制。方法40只大鼠随机分为正常组、模型组、博利康尼组、痰喘丸组、平喘合剂组，分别测定各组大鼠血浆和肺泡灌洗液中IL-2、IL-4、TNF-α、ET-1含量及肺组织嗜酸粒细胞凋亡情况。结果平喘合剂具有良好的解痉平喘、抗炎作用。结论平喘合剂治疗儿童哮喘的作用机制与抑制气道炎症等机制有关。【关键词】平喘合剂；儿童哮喘；实验研究Experimentalstudiesonjuvenilebronchialasthmatreatedwithpingchuanmixture【Abstract】ObjectiveThroughexperimentalstudies，toresearchthecuremechanismsofpingchuanmixturetojuvenilebronchial40maleratswererandomlydividedintonormalgroup，modelgroup，bricanylgroup，TanChuanWangroupandpingchuanmixturegroup，thentomeasurethelevelofIL-2，IL-4，TNF，ET-1inplasmaandBALFandtheapoptosisofEOSinlungPingchuanmixtureexertgoodeffectsonspasm，asthmaandThemechanismofpingchuanmixtureassociatedwithdepressingtheairwayinflammation.【Keywords】pingchuanmixture；childasthma；experimentalstudy支气管哮喘是一种以肥大细胞反应、嗜酸粒细胞浸润为主的气道慢性炎症性疾病，严重威胁人类特别是儿童的身体健康。近年来，全球发病率和死亡率均呈上升趋势，为探索其发病机制，寻求其有效的防治药物已成为当前的研究热点。平喘合剂是我们多年来治疗儿童哮喘发作期的有效方剂，为探讨其作用机制，我们进行了平喘合剂治疗哮喘的实验研究，现总结报告如下。1材料与方法动物选择健康雄性Wistar大鼠40只，体重g，由山东大学实验动物中心提供，符合一级实验动物标准。药物配制平喘合剂药物组成炙麻黄、炒杏仁、细辛、清半夏、炒苏子、川芎、炒地龙、黄芩、沉香、甘草等，由山东中医药大学附属医院中药制剂室按正交试验法筛选工艺，以最佳流程制备，每毫升药液含生药约1g，浓缩成/ml的浓度，250ml/瓶。博利康尼用生理盐水配成/ml的浓度。京制咳嗽痰喘丸用生理盐水配成/ml的浓度。药品与试剂液体石蜡，天津市新精细化工开发中心。羊毛脂，中国嘉定华亭羊毛脂厂。冻干卡介苗制剂60mg/支，兰州生物制品研究所。卵清蛋白冻干粉10g/支，北京鼎国生物技术发展中心，Sigma分装。TNF-α、IL-2、IL-4试剂盒，深圳晶美公司。ET-1试剂盒，购于北京东亚放免所。动物造模与分组取体重为。除正常组外，余4组进行造模，方法抗原液的制备参考林清华主编的《免疫学实验》，并根据以往经验稍做改进［1，2］。称取5g优质羊毛脂置研钵中，逐滴加入液体石蜡油40ml，水浴混匀，装入小磨口瓶内，高压蒸汽灭菌20min，冷却后倒入无菌研钵中，按每毫升加入50mg卵清蛋白、10mg卡介苗，慢慢研磨，制成乳白色混悬液作为抗原液备用。取1ml抗原液于大鼠背部选4个点进行皮下注射，正常组则以等量生理盐水代替。抗原接种后休息5天，从第6天开始卵清蛋白雾化吸入激发，至引喘成功。实验方法给药方法将造模成功后的大鼠进行药物灌胃，药物用量按陈奇提供的常用动物与人的药量换算公式计算［3］。C、D、E组均每次给予相应的药物，每日2次，A、B组以等量的生理盐水代替，共喂养7天。取材激发试验后24h用%戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉取血，EDTA-2Na抗凝，以3000r/min离心5min，取血浆代用。取血后处死动物，结扎左主支气管，用气管套管插在主支气管上，结扎固定，行右支气管肺泡灌洗。针管内抽6ml生理盐水，缓慢推进，保留20s，然后缓慢抽回，共操作3次，收集肺泡灌洗液4ml。以3000r/min离心5min，取上清液待用。观察项目引喘潜伏期实验第13天将致敏大鼠放在玻璃钟罩内，用1%的卵清蛋白生理盐水以5ml/min的流速进行喷雾，每次喷20min，观察至喷雾停止后10min，记录大鼠出现喘息的情况。正常组以生理盐水代替。血浆及BALF中TNF-α、IL-2、IL-4的含量测定取抗凝血以3000r/min离心5min，取血浆待用。采用ELISA法测血浆及BALF中TNF-α、IL-2、IL-4的含量。。血浆及BALF中