HPLC法测定苦玄参中苦玄参苷IA的含量.docx

HPLC法测定苦玄参中苦玄参苷IA的含量【摘要】目的建立苦玄参药材PicriafelterraeLour.的含量测定方法。方法RP-HPLC法，采用C18ODS2柱(5μm，×250mm)，乙腈-%磷酸(34∶66)为流动相，流速为1ml/min，检测波长为264nm。结果苦玄参苷IA进样量在～μg的范围内呈良好的线性关系，r=，平均回收率为%，RSD=%。结论该法操作简便、准确、专属性强，可作为苦玄参药材中苦玄参苷IA的质量控制方法。【关键词】苦玄参；苦玄参苷IA；含量测定；高效液相色谱法【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationinpicriafel-terraepiefeltarraeninIAwasseparatedonaC18ODS2column(5μm，×250mm)anddetectedat264nmand1ml/min，using%phosphoricacid(34∶66)asthemobilephase.ResultsPiefeltarraeninIAinpicriafelterraeLourwasbaselineseparatedandlinearityrangswasμg～μg，correlationcoefficientwasaveragerecoverywas%.ConclusionThemethodissimple，accurateandwithstrongspecificityandcanbeusedforquantifythemainconstituientpiefeltarraeninIAinpicriafelterraeLour.【Keywords】picriafel-terraeLour；piefeltarraeninIA；contentdetermination；highperformanceliquidchromatography(HPLC)苦玄参Picriafel-terraeLour.为玄参科苦玄参属唯一的一种植物，主要分布于广西、广东及云南等地。其作为广西民间用药已有二百多年历史，具有清热解毒，凉血消肿之功效，用于治疗感冒风热、咽喉肿痛、痄腮、胃热腹痛、痢疾、跌打损伤、毒蛇咬伤及痈疖等［1］，因其味极苦，别名又称苦草。苦玄参是广西民间常用药，2005年版《中国药典》正文中尚未收载该品种，但有些以其为原料的中成药如妇炎净胶囊等已收载入《中国药典》［2］。对苦玄参药材及其中成药中苦玄参苷IA含量的测定已有相关报道［3～6］，但均采用薄层扫描法测定，本文则采用HPLC法对不同产地、不同采收季节苦玄参中苦玄参苷IA进行含量测定，现报道如下。1仪器与试药仪器Agilent1100高效液相色谱仪：GB15B-DAD二极管阵列检测器，G1314A-VWD可变波长检测器，Agilent化学工作站；HypersilC18ODS2色谱柱；BP211D电子分析天平；Milliporesimplicity-185超纯水器；SB3200T超声波清洗器(上海必能信有限公司)；LG16-W离心机。试药苦玄参苷IA对照品由广西桂林植物研究所植化室梁小燕老师提供，经HPLC归一化法检测，含量达到%以上。乙腈为色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。本实验所用药材经广西中医学院药学院陈勇教授鉴定为玄参科植物苦玄参Picriafel-terraeLour.的干燥全草。2含量测定方法与结果供试品溶液的制备精密称取约2g苦玄参药材干燥粗粉，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25ml，超声处理30min，放冷，补足重量，滤过，滤液备用。取上述样品溶液1ml于微型离心管中，以10000r/min速度离心10min，取上清液备用，即得。对照品溶液的制备精密称取苦玄参苷IA对照品适量，置25ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为/ml的对照品溶液。色谱条件色谱柱为C18稳定性ODS2柱(5μm，×250mm，大连依利特公司)，流动相为乙腈－%磷酸(34∶66)，流速为1ml/min，检测波长为264nm，柱温为25℃，理论塔板数按苦玄参苷IA计算应不低于3000。在上述色谱条件下，供试品中苦玄参苷IA色谱峰能与其他成分分离，色谱图见图～。线性关系考察分别精密吸取上述苦玄参苷IA对照品溶液(/ml)2μl、4μl、6μl、8μl和10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积值。以峰面积为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，并求出回归方程为y=+，r=。结果表明苦玄参苷IA进样量在～μg间呈良好线性关系，结果见表1，色谱图见图1，标准曲线见图2。a为苦玄参苷IA图1苦玄参苷